基因组文库与cDNA文库构建方法.pptxVIP

二、构建基因组文库分离法;将某种生物整个基因组DNA切割成大小合适的片段，并将所有这些片段都与适当的载体连接，引入相应的宿主细胞中保存和无性扩增。

理论上讲，这些重组载体上带有了该生物体的全部基因，也称为基因文库。;;1.cDNA;2.cDNA文库;（1）以mRNA为材料，是RNA病毒进行基因克隆的唯一途径。

（2）不含内含子序列，可以在细菌中直接表达。

（3）克隆数比DNA文库小的多，容易筛选。

（4）常来自结构基因，包含了所有编码蛋白质的基因，筛选的假阳性率低。

(5)结构基因的表达具有器官、代谢阶段特异性，由不同器官提取的mRNA所组建的cDNA文库也就不同。

（6）在同一个cDNA文库中，不同类型的cDNA分子的数目是大不相同的，表现不均匀性。

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;构建cDNA文库的一般步骤;分离mRNA用商业化的OligodT纤维柱。;反转录酶;用碱处理或用RNaseH降解mRNA-DNA杂交分子中的mRNA。;;;在双链cDNA末端接上人工接头，即可与载体连接，转入受体菌。

或借助末端转移酶给载体和双链cDNA的3’端分别加上几个C或G，成为粘性末端。;(5）文库的筛选（screening）