基因工程常用载体分类.pptxVIP

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2025-11-20 发布于陕西
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基因工程常用载体分类.pptx

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第三章基因工程常用载体;第一节基因克隆载体分类;在基因工程操作中，携带目的基因、实现目的基因进入受体细胞，并在其中得以无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。

;

克隆载体(cloningvector):

使目的片段能在细菌细胞中复制的载体;

表达载体（expressionvector）:

使目的基因能在细菌细胞中表达为RNA或蛋白质的载体。;基因工程中常用的载体：;;（1）能自我复制，有一个复制起点；

（2）多克隆位点；

（3）选择性标记；

（4）安全。;第一节质粒载体;质粒plasmid;2、质粒的空间构型

①共价闭合环状DNA（cccDNA)

（CovalentclosecircularDNA）;③线形DNA（linear，lDNA）;质粒空间构型与电泳速率:;质粒能利用寄主细胞的DNA复制系统进行自主复制和正确分配到子细胞的功能

质粒在宿主细胞内能稳定维持，不会随着细胞的分裂而消失;质粒的复制类型;任何两种含有相似复制子结构的不同质粒，不能同时存在于一个细胞中，这种现象称为质粒的不亲和性或不相容性，这两种质粒称为不亲和性质粒，组成不亲和性群；而彼此能够共存于一个细胞中称为亲和性质粒，亲和质粒则属于不同的不亲和群;5、质粒的迁移;（1）分子量大，拷贝数低;1.提高质粒载体的拷贝数;2.引入多克隆位点MCS;氨苄青霉素抗性（Ampr）

卡那霉素抗性（Kanr）

四环素抗性（Tcr）

链霉素抗性（Strr）

氯霉素抗性（Cmlr）;当带有抗菌素抗性基因的载体进入受体菌后，受体菌才能生长。;4.克隆载体DNA分子应尽可能小;1、克隆载体pBR322;普通型载体pBR322的结构图;pBR322的优点;含有ColE1松弛型复制起始位点，氯霉素扩增之后，每个细胞可达1000~3000拷贝;2、pBR322衍生质粒克隆载体;引入多克隆位点(MCS);3、PCR产物克隆载体－TA载体;PCR产物往往在3’端突出一个A，所以能与这个载体直接连接。