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核酸分子杂交;（一）“戴帽安尾（穿靴）”（核内）——5加帽和多聚腺苷酸化及其调控意义

1.mRNAcaping→5’加上GpppmNP帽子，tailing→加上AA···（50~200bp）尾巴。

意义（1）保护作用—保护mRNA免受核酸酶降解，

（2）标识作用—为翻译提供识别位点（CBP）。

2.rRNA不易被降解的机理可能是因为其组成核糖体是在核内组装的。

3.tRNA合成后形成特殊的空间结构（三叶草，倒L），可能抵抗降解，半寿期长。;第3页，共168页。;hnRNA内含子剪接位点的碱基顺序具有最强的保守性;（二）mRNA的选择剪接对基因表达的调控作用

1.mRNA的选择剪接有多种方式;第6页，共168页。;2.可变剪接的调控机制;⑵RNP的调节

hnRNP-A1在不同组织中的含量变化很大，不参与组成性剪接。在选择5’和3’剪接点时具有可变剪接活性，成为参与可变剪接的调节因子，在体内与SR蛋白共同调节组织特异性的剪接。

U5hnRNP在酵母中参与5’剪接点突变的可变剪接。;⑶外显子限定模型

真核细胞mRNA前体中内含子远远大于外显子，5’与3’剪接位点可以跨越数万个核苷酸准确地组合在剪接体中。

有证据表明，在前速激肽原mRNA前体的可变剪接中，外显子下游的5’剪接位点可影响其上游内含子3’的剪接。;选择剪接对基因表达的调控作用（实例）

（1）Bax基因转录产物的选择剪接

Bax基因编码产物是与细胞凋亡有关的分子，（Bax/Bcl2↑调亡↑）

Bax编码产生的Pr.有几种（α、β、γ等），结构略有差异，差异的产生来自mRNA的选择性剪接。

①Baxα→保留全部（6个）外显子→共192个密码子→译出192AA多肽

②Baxβ→保留全部外显子和第5个内含子（含终止码）→共218个密码子。

③Baxγ→保留1、3、4、5、6外显子，删除第2个外显子→译出151AA多肽。;（2）选择剪接产生的IκBr

①NF-κB是非广泛存在的方式作用因子→可与基因上游启动子元件或增加子内部的κB元件结合而→调节基因表达。

②NF-κB与IκBr结合时→以无活性NFκB/IκBr复合体（105KD）→存在于胞浆

③IκBr基因表达时→通过选择剪接→删除其mRNA中的178个或67个密码子→阅读框移动→产生2种具有新C端Pr.异构体→即IκBr1和IκBr2→2者缺失了1个蛋白激酶A位→该位点磷酸化调节IκBr活性。

④剪接产生IκBr异构体→有可能使NF-κB对胞内作出不同响应，尚在研究中。;第12页，共168页。;（三）RNA编辑;1.核苷酸的替换;第15页，共168页。;⑵A→I替换

在β珠蛋白、c-Myc、成纤维细胞生长因子基因中都有因A→I替换使互补链的U被RNA酶A水解的现象。;2.可读框的改变;第18页，共168页。;第19页，共168页。;3.向导RNA;第21页，共168页。;第22页，共168页。;（四）mRNA运输的调控→mRNA运输是受控制的。

1.3H-udR显示约20%mRNA→胞浆，核内RNA约在1小时内降解成→小片段

2.核孔9nm，但可运输9nm颗粒（如核糖体15nm，在核内组装→入胞作用）

用20nm金颗粒（goldsphere）包装小RNA（如tRNA或5sRNA）→注射到蛙卵（frogoocyte）→可迅速过核孔到→胞浆。但注射入浆→则不能入核说明mRNA主动运输入胞，但机制不清楚。;翻译起始的调控

未受精卵：隐蔽mRNA(maskedmRNA)；受精：招募因子(recruitmentfactor)，激活隐蔽mRNA

阻遏蛋白的调控：铁结合调节蛋白(regulatoryiron-bindingprotein)

翻译起始因子的调控：eIF-2，血红素对珠蛋白合成的调节

5′AUG对翻译的调控作用：减少正常AUG启动翻译的作用，使翻译维持在较低水平

mRNA5′端非编码区长度对翻译的影响;翻译水平的调控;翻译水平的调控是真核生物基因表达多级调控的重要环节之一。真核生物翻译水平调控最普遍的机制是起始因子的磷酸化。

蛋白质合成装置各元件装配活力的改变是导致蛋白质翻译速率变化的主要因素。翻译的速度和细胞生长的速度是密切协调的。;一、翻译因子磷酸化调控;第28页，共168页。;2．其他因子磷酸化对翻译的激活作用

eIF-4B在促有丝分裂剂作用下，随eIF-4F和核糖体蛋白S6一起，在细胞内被磷酸化，激活起始因子eIF-4A和eIf-4B的活性。

3．eIF-2的磷酸化对翻译的