培养基配制与灭菌教程.pptxVIP

培养基的配制与灭菌教学目标素质目标1.培养组培工厂生产安全操作意识；2.具有细致耐心、科学严谨的工作态度；3.培养品德素质，智能素质，身体素质和专业美感素质，培养职业素质和创造力；4.关注学生科学态度的教育，感受科学技术在生产实践中的重要价值。知识目标1.掌握常用培养基的配制方法和步骤；2.熟练掌握培养基的分装和灭菌方法；3.学习培养基配制与灭菌的操作方法。能力目标1.能够掌握常用培养基的配制方法和步骤；2.能够掌握培养基的分装和灭菌方法，3.培养配制培养基的生产和管理能力。

设问：培养基的主要成分有哪些？讨论和答疑

MS培养基配方组成成分数量(mg/l)组成成分数量(mg/l)NH4NO31650Na2-EDTA37.3KNO31900FeSO4·7H2O27.8CaCl2·2H2O440CuSO4·5H2O0.025MgSO4·7H2O370蔗糖30KH2PO4170pH5.8KI0.83肌醇100.0H3BO36.2烟酸0.5MnSO4·4H2O22.3盐酸吡哆醇0.5ZnSO4·7H2O8.6甘氨酸2.0Na2MoO4·2H2O0.25盐酸硫铵等0.4CoCl2·6H2O0.025

移母液调PH值培养基熬制灭菌称取蔗糖、琼脂扎口定容分装二次定容接种确定配方培养基配制与灭菌工艺流程观看视频

本任务的教学目的熟练掌握配制MS工作培养基的基本技能；掌握母液移取、培养基的熬制与分装、扎口技术与灭菌方法。

任务用具实验所配制MS培养基的各种母液；琼脂；蔗糖；蒸馏水；0.1mol∕LNaOH；0.1mol∕LHCL。移液管；量筒；烧杯；搪瓷杯；三角瓶或罐头瓶；标签；记号笔；封口塑料；电炉或微波炉；酸度计或pH试纸；高压灭菌锅等。

方法与步骤配制500ml培养基，配方为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L母液量取与混合琼脂称量与溶解蔗糖称量与溶解加入母液混合液定容至500ml调pH分装与扎口高压灭菌

贮备液成分1升培养基用量（mg）扩大倍数1升储备液用量（mg）每升培养基取用量（ml）MS贮备液1（大量元素）NH4NO3KNO3CaCl2.2H2OMgSO4.7H2OKH2PO41650190044037017020330003800088007400340050MS贮备液2（微量元素）KIH3BO3MnSO4.4H2OZnSO4.7H2ONa2MoO4.2H2OCuSO4.5H2OCoCl2.6H2O0.836.222.38.60.250.0250.02520016612404460172050555MS贮备液3（铁盐）FeSO4.7H2ONa2.EDTA.2H2O27.837.3200556074605MS贮备液4（有机成分）肌醇烟酸盐酸吡哆醇盐酸硫胺素甘氨酸1000.50.50.1220020000100100204005激素贮备液NAA6-BA根据需要100100根据需要

母液量取与混合按照母液顺序和所需量，用量筒和专一对应的移液管依次量取下列各母液于烧杯中，混匀。1）大量元素母液：50ml；2）微量元素母液：1ml；3）铁盐母液：5ml；4）有机物质母液：2.5ml；5）激素类6-BA2.5ml；NAA0.5ml。

琼脂称量与溶解称好的2g琼脂加入搪瓷杯中，加水250ml,加热煮化。先用旺火烧开，再用文火煮溶。注意经常搅拌，防止糊底。

蔗糖称量与溶解称好的15g蔗糖加入搪瓷杯中溶解。

定溶用蒸馏水定溶至500ml。

调pH用酸度计或pH试纸测试pH值，可用0.1mol∕LNaOH或0.1mol∕LHCL将其调到5.8左右。

分装与扎口用玻棒引流，将调好pH值的培养基分装到三角瓶内。100～150ml的三角瓶，每瓶装20～30ml左右的培养基。分装后扎紧瓶口，用记号笔记上班级与小组号。

高压灭菌培养基分装完成后，应在24h内灭菌。灭菌过程如下：（1）加水；（2）装锅；（3）盖盖；（4）加热；（5）到0.05兆帕排放冷空气；（6）升压至121℃,保温15分钟；（7）降压排气；（8）出锅冷却。

实训报告实训目的实训用具实训药品和试剂实训过程实训心得

总结，讨论，拓展配方各成分计算培养基不凝固高压锅的安全

B5培养基配方组成成分数量(mg/l）组成成分数量(mg/l)KNO32500FeSO4·7H2O27.8CaCl2·2H2O150CuSO4·5H2O0.025MgSO4·7H2O250蔗糖40(NH4)2SO4134