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液相色谱仪操作标准流程

液相色谱仪作为一种高精度的分析仪器，其操作的规范性直接关系到分析结果的准确性、重复性以及仪器的使用寿命。建立并严格遵守一套标准的操作流程，是确保液相色谱分析工作顺利进行的基础。本流程旨在为实验室操作人员提供一个清晰、专业且实用的操作指引。

一、开机前准备与检查

在启动液相色谱仪之前，细致的准备与检查工作是不可或缺的，这能有效避免因疏忽导致的实验误差或仪器损坏。

首先，应确保实验室环境符合要求，温度和湿度在仪器规定范围内，避免强光直射和剧烈震动。操作人员需穿着适宜的实验服，佩戴必要的防护用品，如手套和护目镜。

接下来，检查流动相。根据实验方法的要求，准确配制所需的流动相。配制过程中，应使用符合纯度要求的溶剂和试剂，并严格按照比例混合。完成后，需对流动相进行充分脱气处理，以去除其中溶解的气体，防止在泵运行和检测过程中产生气泡，影响流量稳定性和基线噪音。常用的脱气方法包括超声脱气、真空脱气或在线脱气，具体选择需根据实验室条件和流动相性质决定。同时，仔细检查储液瓶是否清洁，并用待使用的流动相冲洗储液瓶内壁，避免残留杂质污染新配制的流动相。

然后是色谱柱的准备。根据分析目标物的性质和实验方法的规定，选择合适型号和规格的色谱柱。检查色谱柱的保存状态，确认柱效是否满足实验要求。安装色谱柱时，务必注意其流向标识，确保流动相的流向与色谱柱箭头指示方向一致。连接色谱柱时，应确保接头清洁，避免死体积的产生，连接力度适中，既要保证密封良好，防止漏液，又不能过度用力损坏螺纹或色谱柱接口。

样品的准备同样关键。样品需按照既定的前处理方法进行处理，确保其澄清、无颗粒物，以免堵塞进样针或色谱柱。必要时，需对样品进行过滤或离心处理。处理后的样品应置于洁净的样品瓶中，并标记清晰，注明样品名称、编号和处理日期等信息。

最后，检查仪器各部件是否连接正确、完好无损。特别是输液泵、进样器、检测器与色谱柱之间的管路连接，确保无松动、无漏液痕迹。同时，确认工作站软件与仪器的连接正常。

二、仪器开机与系统平衡

完成开机前的所有准备工作后，即可按照正确的顺序启动仪器。通常建议先开启实验室的稳压电源，待电压稳定后，再依次打开计算机、色谱工作站，最后开启液相色谱仪主机电源。部分仪器可能有特定的开机顺序要求，需参照仪器说明书执行。

打开仪器主机后，首先启动输液泵。在设置泵参数前，应先将流量调至较低水平，例如0.1-0.2mL/min，然后缓慢升高至实验方法规定的流速。这样可以避免瞬间高压对色谱柱和泵造成冲击。同时，设置合适的柱温箱温度（若实验需要）和检测器参数，如检测波长、灵敏度等。

系统平衡是获得稳定基线和可靠分析结果的关键步骤，需要足够的耐心。在初始流动相条件下，让流动相持续流经色谱柱和检测器。在此过程中，密切关注泵的压力指示是否稳定，观察检测器基线的漂移和噪音水平。通常，判断系统是否平衡的标准是：压力波动在较小范围内（例如±0.1MPa以内），基线漂移平稳且噪音水平低于方法要求。对于梯度洗脱实验，有时还需要进行梯度程序的平衡，即运行几次空白梯度，直至基线稳定。系统平衡所需时间因流动相组成、色谱柱类型、柱温以及仪器状态而异，可能从几十分钟到数小时不等。

在系统平衡过程中，可以利用这段时间再次检查样品制备情况，以及工作站软件的参数设置是否正确，如采集方法、数据存储路径等，确保一切就绪，等待进样分析。

三、样品处理与进样分析

当系统达到平衡状态，基线平稳后，即可开始进行样品的进样分析。

对于手动进样器，操作时应遵循“润洗-排气-进样”的步骤。首先，用待分析的样品溶液润洗进样针内壁至少3-5次，以去除残留的前次样品或清洗溶剂，确保样品浓度的准确性。润洗时，每次吸入样品后应将针芯推至最底部，排尽气泡和残留液体。然后，吸取过量的样品溶液（通常为定量环体积的3-5倍），将进样针插入进样阀的样品孔，缓慢注入样品，同时观察定量环是否充满。待样品完全充满定量环后，迅速将进样阀手柄从“Load”位置切换至“Inject”位置，并同时按下工作站软件的“开始采集”按钮，或确保仪器已设置为触发采集模式。进样过程中，动作应平稳、迅速，避免带入气泡，且切换阀位时不宜过度用力。进样完成后，及时用适当的溶剂清洗进样针，以备下次使用。

对于自动进样器，需提前将制备好的样品瓶按顺序放入样品盘的指定位置，并在工作站软件中编辑样品序列表，包括样品名称、瓶位、进样体积、重复次数等信息。确认自动进样器的清洗程序设置正确，如洗针液类型、洗针次数和体积。启动自动进样程序后，仪器将自动完成取样、进样和清洗等一系列操作，操作人员需在旁观察，确保自动进样过程顺利，无样品瓶位置错误、进样针堵塞或漏液等异常情况发生。

无论是手动进样还是自动进样，进样体积都应根据色谱柱容量和方法要求精确控制。每一针样品进样后，应