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动物检疫检验技术

主讲人：曹晓玉

动物检疫检验技术

免疫学检查

知识点：

一、血清学检测技术

血清学检测技术是建立在抗原体特异性反应基础之上的、利用抗原抗体中已知的任何一方去检测未知的另一方，以达到检疫目的。

血清学检测是检测动物疫病最常用和最重要的方法之一。由于抗原与抗体结合反应的高度特异性，可用已知抗原检测抗体，也可用已知抗体检测抗原。该方法特异性和敏感性都很高，且方法简易而快速，故在疫病的检测中被广泛应用。常用的有凝集试验、沉淀试验、标记抗体技术等方法。

（一）凝集反应

细菌红细胞等颗粒性抗原，或吸附在红细胞乳胶颗粒性载体表面的可容性抗原，与相应抗体结合，在有适当电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的凝集团块，称为凝集试验。

凝集试验可根据抗原的性质反应的方式分为直接凝集试验和间接凝集试验。

1.直接凝集试验

直接凝集反应有玻片法和试管法。玻片法在洁净的载玻片或班离板上进行；试管法在洁净的试管中进行。

平板凝集和试管凝集反应：布氏杆菌病和猪传染性萎缩性鼻炎；全血平板凝集反应：鸡白痢、鸡支原体病

间接凝集试验

先将可溶性抗原(或抗体)吸附在载体颗粒(红细胞、乳胶等,然后与相应抗体(或抗原)作用。

间接凝集反应若以红细胞(多用绵羊红细胞)做载体，称为间接血凝反应；若以乳胶做载体，称为乳胶凝集反应。

间接凝集反应若用已知抗原吸附在载体上鉴定抗体，称为正向间接凝集反应;若用已知抗体吸附在载体上来鉴定抗原，称为反向间接凝集试验。

反向间接凝集试验主要应用于猪传染性水疱病与猪口蹄疫检测。

3.血凝和血凝抑制试验

某些病毒能选择性凝集某些动物的红细胞，这种凝集红细胞的现象称为血凝(HA);在病毒悬液中加入特异性抗体作用一定时间,再加入红细胞时,红细胞的凝集被抑制(不出现凝集现象),称红细胞凝集抑制反应(HI)。

HA和HI广泛应用在鸡新城疫、禽流感、鸡减蛋综合症等疫病的诊断检测中。

(二)沉淀反应

可溶性抗原(如细菌的外毒素、内毒素、菌体裂解液，病毒的可溶性抗原、血清、组织浸出液等)与相应抗体结合,在适当电解质存在下，形成肉眼可见的白色沉淀，称为沉淀试验。

1.环状沉淀反应（阿司克里氏反应——Ascoli试验）常用于炭疽病的诊断和皮张炭疽检疫。

2.琼脂扩散反应是马传染性贫血病、鸡马立克氏病、鸡传染性支气管炎、鸡传染性喉气管炎及鸡传染性法氏囊病常用的诊断方法。

(三)标记抗体技术

根据抗原抗体结合的特异性和标记分子的敏感性而建立的诊断检测技术，称为标记抗体技术。包括酶标记抗体技术和荧光标记抗体技术又称免疫荧光技术(IFT)。

1.酶标记抗体技术

包括免疫酶染色法和酶联免疫吸附试验(ELISA)。主要特点：简便、快速、敏感、易于标准化、适合大批样品检测。酶标记抗体技术是猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合症、猪弓形虫病、猪囊虫病、猪旋毛虫病以及牛白血病、禽白血病等疫病诊断的农业行业标准方法。

2.免疫荧光技术(IFT)

主要用于抗原的定位、定性。主要特点是特异性强、敏感性高、检测速度快。

(四)补体结合试验（CFT）

可溶性抗原，如蛋白质、多糖、类脂质和病毒等，与相应抗体结合后，抗原抗体复合物可以结合补体，但这一反应肉眼不能察觉，如再加入红细胞和溶血素，即可根据是否出现溶血反应来判定反应系统中是否存在相应的抗原或抗体。这个反应就是补体结合反应。

补体结合试验中,提供补体的血清常来源于豚鼠，可用于马鼻疽、钩端螺旋体病、脑炎病毒等疫病的检测。

二、变态反应检测技术

某些疫病在传染过程中引起以细胞免疫为主的IV型变态反应，这种变态反应是由病原体或其代谢产物在传染过程中作为变应原而引起，具有很高的特异性和敏感性。

变态反应诊断是重要的免疫学诊断方法之一，是将变应原接种动物后，通过观察动物明显的局部或全身性反应进行判断。该方法主要应用于一些慢性传染病的检疫与监测，尤其适合群体检疫和畜群净化，是牛结核病检疫的常规方法。

常用变态反应法进行动物疫病的检疫，例如：细菌性疫病中的结核病、鼻疽、布鲁氏菌病；病毒性疫病中的疱疹病毒病；真菌性疫病中的流行性淋巴管炎；寄生虫病中的血吸虫病。