DB13-T 1106-2009 液体乳中青霉噻唑酸钾的测定 高效液相色谱法.docxVIP

DB13T液体乳中青霉噻唑酸钾的测定高效液相色谱法

本标准规定了液体乳中青霉噻唑酸钾含量测定的高效液相色谱法。本标准适用于液体乳中青霉噻唑酸钾的定量分析。

青霉噻唑酸钾作为β内酰胺类抗生素的一种，在乳制品中的残留检测具有重要意义。本方法采用高效液相色谱技术，通过优化样品前处理条件和色谱分析参数，建立了适用于液体乳基质中青霉噻唑酸钾残留量的检测方法。该方法具有灵敏度高、选择性好、准确度高等特点，可为乳制品质量安全监管提供技术支撑。

本标准所规定的测定方法原理为：样品经乙腈提取，正己烷除脂，HLB固相萃取柱净化后，采用C18色谱柱分离，以乙腈磷酸二氢钾溶液为流动相进行梯度洗脱，紫外检测器在210nm波长下检测，外标法定量。

本方法所用试剂和材料除另有规定外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

乙腈：色谱纯；磷酸二氢钾：优级纯；正己烷：分析纯；甲醇：色谱纯；青霉噻唑酸钾标准品：纯度≥98.0%；HLB固相萃取柱：200mg/6mL；0.45μm微孔滤膜。

标准储备液的制备：准确称取青霉噻唑酸钾标准品10.0mg（精确至0.1mg），置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配制成100μg/mL的标准储备液，于4℃避光保存，有效期3个月。

标准工作液的制备：准确吸取适量标准储备液，用甲醇水（10:90，v/v）逐级稀释成0.1、0.5、1.0、2.0、5.0μg/mL的标准工作系列溶液，现用现配。

仪器和设备：高效液相色谱仪（配紫外检测器）、电子天平（感量0.1mg）、涡旋混合器、离心机（转速≥4000r/min）、氮吹仪、固相萃取装置、超声波清洗器、pH计。

色谱条件：色谱柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：A相为0.02mol/L磷酸二氢钾溶液（pH3.0），B相为乙腈；梯度洗脱程序：05min，10%B；515min，10%30%B；1520min，30%B；2025min，30%10%B；2530min，10%B；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：210nm；进样量：20μL。

样品处理：称取5.0g（精确至0.01g）液体乳样品于50mL离心管中，加入10mL乙腈，涡旋混合2min，以4000r/min离心5min，取上清液。重复提取一次，合并上清液。加入10mL正己烷，涡旋混合1min，静置分层后弃去正己烷层。将提取液转移至已活化的HLB固相萃取柱，依次用3mL水和3mL甲醇水（10:90，v/v）淋洗，抽干后用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液。洗脱液在40℃水浴中氮吹至近干，用1.0mL甲醇水（10:90，v/v）溶解残渣，过0.45μm微孔滤膜，供液相色谱分析。

测定：分别吸取标准工作系列溶液和样品处理液各20μL注入液相色谱仪，按色谱条件进行测定，以保留时间定性，峰面积外标法定量。

结果计算：样品中青霉噻唑酸钾的含量按公式（1）计算：

X=(c×V)/m

式中：

X——样品中青霉噻唑酸钾的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；

c——从标准曲线上查得的样液中青霉噻唑酸钾的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；

V——样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；

m——样品质量，单位为克（g）。

方法检出限：本方法的检出限为0.05mg/kg，定量限为0.1mg/kg。

精密度：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

回收率：在空白样品中添加0.1、0.5、1.0mg/kg三个浓度水平的青霉噻唑酸钾标准品，进行加标回收试验，回收率范围为85.0%105.0%。