沙门氏菌的检测讲课文档.pptVIP

沙门氏菌的检测;一、实验目的;二、实验器材;1.四硫磺酸钠黄绿（TTB）增菌液;蛋白胨10.0g蒸馏水1000mL

pH7.0±0.2牛肉膏5.0g

氯化钠3.0g

碳酸钙45.0g（碳酸钙可以调节ph,是培养基在养菌过程中维持一定ph,否则ph过低,影响菌株生长另外还有筛选产酸菌的作用）

除碳酸钙外，将各成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，再加入碳酸钙，调节pH，高压灭菌121℃，20min;硫代硫酸钠溶液;ＴＴＢ培养基使用方法和注意事项;

3.原理：四硫酸钠是由硫代硫酸钠和碘经氧化生成而来，它对大肠菌群有抑制作用，对沙门氏菌无影响。因沙门氏菌具有四硫磺酸酶，能分解四硫磺酸钠，而大肠菌群没有这种酶，故生长受抑制。碳酸钙为缓冲剂，可使沙门氏菌不致因酸碱度改变而死亡。

;2.氯化镁孔雀绿增菌液（MM);MM增菌液各成分的作用;3.亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液;SC增菌液各成分的作用;4.亚硫酸铋（BS）琼脂;

将前三种成分加入300mL蒸馏水（制作基础液），

硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入20mL和30mL蒸馏水中，柠檬酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一20mL和30mL蒸馏水中，

琼脂加入600mL蒸馏水中。然后分别搅拌均匀，煮沸溶解。冷至80℃左右时，先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀，倒入基础液中，混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀，倒入基础液中，再混匀。调节pH，随即倾入琼脂液中，混合均匀，冷至50℃～55℃。加入煌绿溶液，充分混匀后立即倾注平皿。;BS培养基的原理;5.HE琼脂;②甲液的配制

硫代硫酸钠34.0g柠檬酸铁铵4.0g蒸馏水100mL

③乙液的配制

去氧胆酸钠10.0g蒸馏水100mL

④Andrade指示剂

酸性复红0.5g1mol/L氢氧化钠溶液16.0mL

蒸馏水100mL，将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液1mL～2mL。;制法

将前面七种成分溶解于400mL蒸馏水内作为基础液;将琼脂加入于600mL蒸馏水内。然后分别搅拌均匀，煮沸溶解。加入甲液和乙液于基础液内，调节pH。再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷至50℃～55℃倾注平皿。

注:①本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性。;.HE琼脂的原??;6.SS琼脂配方;月示胨、牛肉粉提供碳源、氮源、维生素和矿物质；

乳糖、葡萄糖为可发酵的糖类；

三号胆盐、枸橼酸钠和煌绿抑制革兰氏阳性菌及大多数的大肠菌群和变形杆菌，但不影响沙门氏菌的生长；

硫代硫酸钠和枸橼酸铁用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色；

中性红为pH指示剂，可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌鉴别开，前者为红色菌落，后者为无色菌落

发酵糖产酸的菌落呈红色，不发酵糖的菌落为无色；

琼脂是培养基的凝固剂。;1.前增菌：用无选择性的培养基使处于濒死状态的沙门菌恢复活力;

2.选择性增菌：使沙门氏菌优势繁殖，大多数其它细菌受到抑制;

3.选择性平板分离培养：分离出所需的细菌;

4.生化试验：鉴定分离出来的细菌是否符合所检项目的细菌;

5.血清学鉴定：进一步鉴定。;加工过的样品：

称取25g（mL）样品放入盛有225mL缓冲蛋白胨水（BPW）的无菌均质杯，以8000～10000r/min均质1~2min，或置于盛有225mLBPW的无菌均质袋，拍击式均质拍打1~2min。液体样品不需均质，振摇混匀。

无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中（如使用均质袋，可直接培养），36±1℃培养8～18h。

冷冻产品，应在45℃以下不超过15min，或2℃~5℃不超过18h解冻。

未加工样品：。。。。。;轻轻摇动培养过的样品混合物，

移取1mL，转种于10mL四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液内，42℃±1℃培养18～24h。

同时，另取1mL，转种于10mL亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液内，36±1℃培养18～24h。;（3）分离---选择性平板分离;;SS琼脂平板;;BS琼脂;BS上的菌落;BS＋;（4）生化试验;

1.三糖铁(TSI)试验

自选择性琼脂平板上分别挑取两个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再底层穿刺，用一空白培养基作对照试验。

2赖氨酸脱羧酶试验：

接种三糖铁琼脂的接种针不要灭菌，直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，

于36±1℃培养18～24h，必要时可延长至48h。;三糖铁（TSI）琼脂试验;三糖铁(TSI)试验;思考题;赖氨酸脱羧酶试验;;3进一步生