HLA-B27检测及其临床应用.pptVIP

徐美胜

2016年11月24日;HLA-B27疾病相关

血清阴性脊柱关节病类型及特点

强直性脊柱炎特点及其与B27关联机制

HLA-B27检测方法

MLCT、ELISA、IMS-ELISA、FCM、PCR-SSP;;这是一组慢性炎症性风湿性疾病，具有特定的病理生理、临床、放射学和遗传特征，炎性腰背痛伴或不伴外周关节炎，加之一定特征的关节外表现是这类疾病特有的症状和体征。这一类疾病包括：强直性脊柱炎(ankylosingspondylitis，AS)，反应性关节炎(reactivearthritis，ReA)，银屑病关节炎(psoriaticarthritis，PsA)，炎症性肠病性关节炎(arthropathyofinflammatoryboweldisease，IBD)，未分化脊柱关节炎和幼年慢性关节炎。几种脊柱关节炎病情逐渐进展，都可能发展成典型的强直性脊柱炎;RF（一）

家族聚集现象

与HLA-B27不同程度相关

皆可影响脊柱，都有不同程度的骶髂关节炎，也可影响外周关节，下肢关节多于上肢关节，且呈不对称性。

与革兰氏阴性杆菌有一定相关性：

强直性脊柱炎与肠道肺炎克雷白杆菌相关

Reiter综合征与沙眼衣原体、福氏痢疾杆菌相关

反应性关节炎与沙门杆菌、痢疾杆菌、耶尔森菌和HP相关;临床上有很多共同或重叠之处：

眼炎，尿道炎，前列腺炎，

口腔、肠道和生殖器溃疡

结节性红斑，银屑病样皮疹

坏死性脓皮病，血栓性静脉炎

基本病理变化以肌腱端周围和韧带附着于骨的部位为主(附着端炎)而非滑膜，也可发生在眼、主动脉瓣、肺实质和皮肤，而不同于以滑膜病变为主的类风湿性关节炎，而且无类风湿皮下结节。;AnkylosingSpondylitis，AS

患病率：0.3%，20-30岁，男女比例10:1，有家族倾向；

主要侵犯：中轴关节（骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织）

可伴发外周关节及关节外表现，严重者发生脊柱畸形和关节强直

B27检测可作为有相关症状或高危人群AS早期的筛选方法！

AS不是RA的一种特殊类型！

;HLA-B27阴性的AS;*;抗原水平

微量细胞毒法

ELISA

IMS-ELISA

流式细胞术法

基因水平

PCR-SSP;原理：如果受试者淋巴细胞表面表达有相应的HLA-B27抗原，就可以与B27抗体结合，形成Ag-Ab复合物激活补体，发生对细胞膜的破坏及细胞杀伤作用，通过染色法观察，死细胞的细胞??通透性改变，染料能够进入使之着色，而活细胞细胞膜完整不被染色。根据死细胞占全部细胞的百分比，可以判断受试者淋巴细胞表面是否存在HLA-B27抗原及其与抗体的反应强度。

优点：不需特殊仪器设备，易于操作，一般的实验室都可开展。

缺点：标本存放不能超过8小时；感染可以使细胞膜表面的B27分子的数量或结构改变，影响MLCT的结果，易出现假阴性。;原理：应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中HLA-B27水平。用纯化的B27抗体包被微孔板，依次加入HLA-B27抗原（待检标本）、生物素化的抗HLA-B27抗体、HRP标记的亲和素，形成双抗体夹心反应，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的HLA-B27呈正相关。

其结果与MLCT法符合率为99％，且不受感染因素的影响，重复性好。;磁珠分离与ELISA结合

B27单抗标记磁珠

HRP标记CD45单抗

通过磁场分离游离相

优点：

反应时间短（1小时完成）

对标本新鲜度要求不高

2～8℃静置4d之内可用;利用荧光标记的HLA-B27单克隆抗体，与细胞表面的B27抗原结合，使结合后的淋巴细胞具有一定的荧光强度，这种荧光强度可由流式细胞仪测得的通道值来反映，以其值的高低判断HLA-B27抗原表达百分比，从而判断HLA-B27是否阳性。

优点：全自动仪器检测，减少了人为因素的影响，重复性高，结果判断准确，为目前较为理想的方法，国外已将FCM法检测HLA-B27作为AS诊断的常规检测方法。

缺点：仪器昂贵，目前只在较大医院应用，且荧光易淬灭。;通过设计基因序列特异的引物SSP，特异性的扩增出标本中的HLA-B27基因片段，以琼脂糖凝胶电泳分析PCR扩增产物，若出现目的条带则表示HLA-B27为阳性。

优点：基因水平的检测

直接对HLA-B27原基因进行扩增分型，灵敏度高，特异性强。

缺点：耗时长，需要跑电泳，需要特定的实验仪器及严格的实验条件，在临床上普遍开展此项检查有一定的难处。;谢谢大家！