口腔真菌鉴定技术.pptxVIP

演讲人：

日期:

口腔真菌鉴定技术

CATALOGUE

目录

01

概述

02

常见真菌种类

03

基础鉴定方法

04

分子鉴定技术

05

临床应用流程

06

挑战与发展

01

概述

口腔真菌定义与分类

真菌的基本特性

共生与致病性

主要分类

口腔真菌是一类存在于口腔环境中的真核微生物，具有细胞壁和细胞核，可形成菌丝或酵母形态，广泛分布于口腔黏膜、舌背、牙菌斑等部位。

根据形态和致病性可分为酵母菌（如白色念珠菌、光滑念珠菌）、丝状真菌（如曲霉菌、毛霉菌）及双相真菌（如组织胞浆菌），其中白色念珠菌是口腔最常见的条件致病菌。

多数口腔真菌为共生菌，但在免疫力低下、长期使用抗生素或激素等情况下可转化为致病菌，引发口腔真菌病（如鹅口疮）。

鉴定技术重要性

精准诊断需求

不同真菌的致病机制和药物敏感性差异显著，准确鉴定可指导临床针对性用药，避免经验性治疗的盲目性。

流行病学监测

通过鉴定技术追踪耐药菌株和新兴病原体，为公共卫生防控提供数据支持，如白色念珠菌耐药株的全球传播监测。

科研价值

真菌鉴定技术是研究口腔微生态平衡、宿主-真菌互作机制的基础工具，有助于开发新型抗真菌疗法。

常见感染类型

多由烟曲霉引起，侵袭性感染可导致口腔溃疡或坏死，多见于免疫功能严重受损患者。

曲霉病

毛霉菌病

隐球菌感染

以白色念珠菌感染为主，表现为口腔黏膜白斑（鹅口疮）、口角炎等，常见于婴幼儿、HIV感染者及糖尿病患者。

罕见但凶险，累及口腔时表现为快速进展的组织坏死，需紧急干预，常见于未控制的糖尿病患者。

虽以肺部为主，但免疫抑制患者可能继发口腔病变，需通过特殊染色（如墨汁染色）鉴别。

念珠菌病

02

常见真菌种类

念珠菌属特征

形态学特点

念珠菌属真菌在显微镜下呈现卵圆形或球形，可形成假菌丝和芽生孢子，革兰染色呈阳性，在沙保弱培养基上形成乳白色光滑菌落。

生化特性

能发酵葡萄糖、麦芽糖等碳水化合物，尿素酶试验阴性，部分菌种如白色念珠菌可产生厚膜孢子，是重要的鉴别特征。

致病性差异

白色念珠菌致病性最强，常引起口腔黏膜感染；光滑念珠菌和热带念珠菌对唑类药物易产生耐药性，需通过分子鉴定区分。

分子标志物

其基因组中保守的ITS区域和D1/D2区序列可作为特异性鉴定靶点，通过PCR扩增和测序实现精准分型。

其他病原真菌区分

曲霉属特征

菌丝呈锐角分枝，分生孢子头呈放射状排列，需通过乳酸酚棉蓝染色观察分生孢子梗的形态，与念珠菌的酵母样形态显著不同。

毛霉目真菌

菌丝宽大无隔，直角分枝，培养需用PDA培养基，临床鉴别需结合组织病理学中的血管侵袭性生长特点。

隐球菌属鉴定

具有厚荚膜，墨汁染色可见透亮晕圈，尿素酶试验阳性，与念珠菌的生化特性存在明显差异。

分子鉴别技术

针对18SrRNA基因或β-微管蛋白基因设计特异性引物，通过实时荧光PCR实现快速区分混合感染菌种。

致病机制解析

1

2

3

4

黏附与侵袭

念珠菌通过细胞表面黏附素（如ALS基因家族编码蛋白）与宿主上皮细胞结合，分泌水解酶（蛋白酶、磷脂酶）破坏组织屏障。

真菌在义齿或黏膜表面形成多细胞聚合体，胞外基质包含β-葡聚糖、几丁质等成分，导致药物渗透障碍和持续性感染。

生物膜形成

免疫逃逸策略

病原体通过改变表面抗原（如甘露聚糖层修饰）躲避巨噬细胞识别，并抑制Th1型细胞免疫应答，促进慢性感染进程。

毒力因子调控

环境pH、铁离子浓度等信号通过MAPK和cAMP-PKA通路调控菌丝转化及毒力基因表达，影响感染严重程度。

03

基础鉴定方法

显微镜检查技术

通过采集口腔黏膜或分泌物样本，使用光学显微镜观察真菌形态特征，如菌丝、孢子等结构，快速判断是否存在真菌感染。

直接镜检法

应用荧光染料（如钙荧光白）对样本进行染色，增强真菌结构的可见性，提高检测灵敏度和准确性，适用于低浓度真菌样本的鉴定。

荧光染色技术

利用扫描或透射电子显微镜观察真菌超微结构，提供更高分辨率的形态学信息，辅助区分相似菌种。

电子显微镜分析

01

02

03

培养与分离流程

选择性培养基制备

使用沙氏葡萄糖琼脂（SDA）或显色培养基，添加抗生素抑制细菌生长，优化真菌分离效率，确保纯培养物的获取。

温控培养条件

根据不同真菌的生长特性，设置适宜的温度（如25-30℃）和湿度环境，定期观察菌落形态、颜色变化及生长速度等特征。

单菌落纯化技术

通过划线法或稀释涂布法分离混合培养物中的单一菌株，结合显微镜检查验证纯度，为后续生化或分子鉴定提供标准化样本。

生化测试应用

糖同化试验

通过检测真菌对不同碳源（如葡萄糖、乳糖、麦芽糖）的利用能力，构建代谢谱图，区分念珠菌属、曲霉属等常见口腔致病菌。

04

分子鉴定技术

PCR技术原理

扩增目标DNA片段

PCR（聚合酶链式反应）通过变性、退火、延伸三个步骤循环扩增特定DNA序列，利用引物特异性结合目标