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基因工程知识点超全

一、基因工程概述

基因工程，常被称为遗传工程或重组DNA技术，其核心在于对生物体的遗传物质——主要是脱氧核糖核酸（DNA）进行人为的“剪切”、“粘贴”和“编辑”，从而实现基因的转移、重组或修饰，最终达到改变生物体遗传特性或获得特定产物的目的。这项技术的诞生，标志着人类对生命现象的研究从认识层面迈入了能动改造的新阶段，它打破了物种间天然的生殖隔离屏障，使得不同物种甚至远缘物种的基因可以在实验室条件下进行重组和表达。

从学科交叉的角度看，基因工程是分子生物学、遗传学、生物化学、微生物学等多学科知识与技术融合的产物。它不仅为基础生物学研究提供了强大的工具，揭示了生命活动的许多基本规律，更在医药、农业、工业、环保等多个领域展现出巨大的应用潜力和产业化价值。

二、基因工程的理论基础

基因工程的建立并非偶然，它植根于一系列重要的理论突破：

1.DNA是遗传物质的证明：通过经典的肺炎双球菌转化实验等研究，确立了DNA作为遗传信息载体的核心地位，这是基因工程得以开展的根本前提。

2.DNA双螺旋结构模型：沃森和克里克提出的DNA双螺旋结构，清晰地揭示了遗传信息的存储方式和复制机制，为理解DNA的操作提供了分子基础。

3.遗传密码的通用性：几乎所有的生物（从简单的病毒到高等动植物）都使用同一套遗传密码字典，即特定的核苷酸序列对应特定的氨基酸序列。这意味着一个基因，无论来自何种生物，只要其核苷酸序列正确，理论上就能在另一种生物中指导合成相应的蛋白质。这是基因工程能够实现跨物种基因表达的关键理论依据。

4.基因的中心法则：遗传信息从DNA转录为RNA，再翻译为蛋白质的流动方向，阐明了基因控制性状的基本途径，也为我们通过改造基因来改变蛋白质功能或表型提供了思路。

三、基因工程的关键工具酶

基因工程的操作离不开一系列具有特定功能的工具酶，它们如同“分子剪刀”、“分子胶水”和“分子复印机”，使得对DNA的精确操作成为可能。

1.限制性内切核酸酶（RestrictionEndonucleases）：

*功能：能够识别并切割DNA分子中特定的核苷酸序列（通常是回文序列）。

*分类：常用的是II型限制性内切酶，它们识别和切割的位点通常是相同的，且切割后可产生黏性末端（如EcoRI切割产生5黏性末端）或平末端（如SmaI）。

*作用：获取目的基因片段，切割载体，为后续的连接做准备。

2.DNA连接酶（DNALigase）：

*功能：催化两个DNA片段的3-羟基末端和5-磷酸末端之间形成磷酸二酯键，从而将它们连接起来。

*常用类型：T4DNA连接酶是基因工程中最常用的连接酶，它既能连接黏性末端，也能连接平末端（效率较低）。

*作用：将目的基因与载体连接，构建重组DNA分子。

3.DNA聚合酶（DNAPolymerase）：

*功能：以DNA或RNA为模板，按照碱基互补配对原则，催化脱氧核糖核苷酸逐个加到引物或DNA链的3-羟基末端，合成新的DNA链。

*常用类型：

*大肠杆菌DNA聚合酶I及其Klenow片段：Klenow片段具有5→3聚合酶活性和3→5外切酶活性，常用于填补DNA黏性末端、cDNA第二链合成等。

*TaqDNA聚合酶：耐热，用于聚合酶链式反应（PCR）。

*逆转录酶（ReverseTranscriptase）：以RNA为模板合成DNA（cDNA），是获取真核生物目的基因的重要工具。

4.其他工具酶：

*碱性磷酸酶（AlkalinePhosphatase）：去除DNA或RNA末端的5-磷酸基团，防止载体自连。

*末端脱氧核苷酸转移酶（TerminalDeoxynucleotidylTransferase,TdT）：在DNA片段的3-羟基末端添加同聚尾（如polyA或polyT），便于连接或克隆。

*核酸酶（Nucleases）：如S1核酸酶可降解单链DNA或RNA，用于去除双链核酸中的单链部分。

四、基因工程的载体系统

载体（Vector）是能够携带目的基因进入宿主细胞并进行复制和表达的DNA分子。理想的载体应具备以下特点：能自主复制；具有多个单一的限制性内切酶识别位点（多克隆位点，MCS）；具有易于筛选的标记基因；分子量小，拷贝数高；安全性好。

1.质粒载体（PlasmidVectors）：

*来源：细菌染色体外的小型环状双链DNA分子。

*特点：自主复制，拷贝数可高可低，易于操作。

*常用类型：

*克隆质粒：如pUC系列、pBluescript系列，主要用于目的基因的克隆、扩增和测序。通常含有氨苄青霉素抗性基因（ampR）、四环素抗性基因（tetR）等筛选标