淋巴细胞分离液比重为10770001进行密度梯度离心.pptVIP

流式细胞分析系统（临床见习）流式细胞分析：是以流式细胞仪（FCM）为检测手段的一种能高速精确地对单个细胞的理化及生物学特性进行多参数定量分析的先进技术。特点：单个细胞分析速度快多参数灵敏度高准确性好临床分析型流式细胞仪综合(分选)型类型实验目的基本原理见习内容见习报告教学内容熟悉FCM的工作原理和技术流程。了解FCM在血液学、细胞遗传学、肿瘤生物学等学科中的应用。实验目的基本原理FCM在荧光标记探针协助下，对悬浮的单个细胞或微粒表面或内部的化学成分特性进行快速分析或纯化分选。流动室计算机系统处理、分析散射光和特定的荧光信号待测样品制备细胞排成单列激光检测区先制备待测的单细胞悬液，经过荧光抗体标记后，让待测细胞在气体压力的驱动下流经充满鞘流的流动室。细胞排成单列逐个依次通过激光检测区。被荧光染色的细胞在垂直入射的激光束照射下，产生了细胞的散射光信号和特定波长的荧光信号。单细胞悬液荧光抗体标记光电倍增管通过不同的检测器和特定波长选择通透性的滤光片，可获得不同方向的散射光和不同波长的荧光信号来，经过一系列的的光电倍增管放大后，由计算机系统收集、数字化处理，最后通过计算机软件分析结果。基本原理单细胞液流柱流动室振动液流断裂成液滴空白液滴含细胞的液滴废液容器偏转落入收集器超声压电晶体高频振动不充电充电细胞分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。FCM的结构及主要部件样品制备免疫荧光标记方法技术流程质量控制设备维护结果判定见习内容流式细胞仪目前临床型流式细胞仪主要有FACSCalibur、EPICSXL和CytomicsFC500，两家公司的仪器在使用上有所不同。EPICSXLCytomicsFC500FACSCalibur1.液流系统2.光学系统3.计算机控制系统FCM的基本结构及部件喷嘴荧光信号激光束鞘液液流系统FCM的液流系统（如何形成单个细胞流）样本管鞘液管FS前向角散射光检测器SS侧向角散射光检测器FL1荧光检测器液滴激光束光学系统FL2荧光检测器FL3荧光检测器FL4荧光检测器5.将收集的腹腔液置于离心管中，以1500rpm离心10min。6.弃上清，吸取沉淀细胞涂片，待自然干燥。7.将瑞氏染液滴于上述涂片，先染30～60s。然后加等量蒸馏水，用洗耳球吹打混匀，继续染10～15min，水洗，晾干后油镜下观察。油镜下可见圆形或不规则形状核呈蓝紫色的巨噬细胞，CRBC多为椭圆形胞浆呈淡紫红色有核的细胞。结果判断被吞噬消化的鸡红细胞核模糊，核肿胀，染色淡，胞质浅染，胞核呈浅灰黄色。结果判断1.腹腔注射CRBC后，要注意掌握好吞噬作用时间。时间太长CRBC可被消化，时间过短则尚未被吞噬。2.剪开小鼠腹腔吸取腹腔液时应避免出血，否则将影响试验结果。3.涂片的薄厚要适当，否则将影响结果观察。注意事项1.为何在实验前3d要给小白鼠腹腔注射6%淀粉肉汤，有何作用？2.临床上若需要检测巨噬细胞功能，应如何采集人巨噬细胞？实验讨论：福建医科大学陈敏实验四血清总补体活性测定（验证性实验）实验目的实验原理试剂与器材操作步骤结果判断注意事项实验讨论教学内容：观察血清补体介导的溶血现象，了解补体系统在免疫反应过程中的效应作用。实验目的绵羊红细胞（SRBC）与相应抗体（溶血素）结合形成的致敏红细胞可通过经典活化途径激活补体，从而导致SRBC溶解。当红细胞与溶血素的浓度恒定时，在规定的反应时间内，补体的量及其活性与溶血程度正相关。实验原理溶血程度与补体含量的关系由于溶血程度在30%～70%时，补体的用量稍有变化就会对溶血程度产生很大的影响，所以通常以50%溶血程度（CH50）作为判定反应终点的指标，而不用100%溶血程度。1.巴比妥缓冲液（BBS，pH7.4）。2.2%SRBC悬液。3.溶血素（抗SRBC抗体）按效价用BBS稀释至2个单位。4.待检血清、生理盐水、17g/L高渗盐水。5.器材离心机、试管、刻度吸管、恒温水浴箱、721分光光