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层析技术试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共30分）

1.以下哪种层析技术的分离机制基于溶质分子与固定相表面活性基团的可逆吸附作用？

A.分配层析

B.吸附层析

C.离子交换层析

D.凝胶过滤层析

2.在凝胶过滤层析中，决定溶质洗脱顺序的主要因素是：

A.分子电荷

B.分子极性

C.分子大小与形状

D.分子疏水性

3.离子交换层析中，若目标蛋白的等电点（pI）为6.5，缓冲液pH设为7.2，应选择哪种类型的离子交换剂？

A.阳离子交换剂（负电荷基质）

B.阴离子交换剂（正电荷基质）

C.疏水性交换剂

D.亲和交换剂

4.薄层色谱（TLC）中，衡量溶质迁移能力的参数是：

A.保留时间（tR）

B.分离度（R）

C.比移值（Rf）

D.理论塔板数（N）

5.高效液相色谱（HPLC）与经典液相色谱的主要区别在于：

A.使用气体作为流动相

B.采用高压泵驱动流动相

C.固定相颗粒直径小于10μm

D.B和C均正确

6.亲和层析的核心是：

A.固定相表面的电荷基团

B.溶质与固定相的疏水相互作用

C.配基与目标分子的特异性识别

D.溶质分子大小差异

7.在反相高效液相色谱（RP-HPLC）中，固定相通常为：

A.极性键合相（如氨基）

B.非极性键合相（如C18）

C.离子交换树脂

D.葡聚糖凝胶

8.分配层析的分离基础是溶质在两相中的：

A.吸附能力差异

B.分配系数差异

C.电荷密度差异

D.分子形状差异

9.凝胶过滤层析中，完全排阻的分子对应的洗脱体积（Ve）等于：

A.外水体积（Vo）

B.内水体积（Vi）

C.总体积（Vt）

D.死体积（V0）

10.离子交换层析中，洗脱目标蛋白的常用方法不包括：

A.增加流动相离子强度

B.改变流动相pH

C.降低流动相温度

D.使用竞争性离子

11.以下哪种检测器不适用于高效液相色谱？

A.紫外-可见检测器（UV-VIS）

B.火焰离子化检测器（FID）

C.示差折光检测器（RID）

D.荧光检测器（FLD）

12.亲和层析中，若目标蛋白为抗体，常用的配基是：

A.金属离子（如Ni2?）

B.抗原

C.肝素

D.纤维素

13.在纸层析中，固定相通常是：

A.滤纸纤维结合的水

B.硅胶

C.离子交换树脂

D.聚苯乙烯

14.衡量层析柱分离效率的重要参数是：

A.保留时间

B.分离度

C.柱效（理论塔板数）

D.峰宽

15.疏水相互作用层析（HIC）的洗脱条件通常为：

A.高盐浓度上样，低盐浓度洗脱

B.低盐浓度上样，高盐浓度洗脱

C.高pH上样，低pH洗脱

D.低离子强度上样，高离子强度洗脱

二、填空题（每空1分，共20分）

1.层析技术的基本原理是利用混合物中各组分在________和________两相中的分配系数、吸附能力或分子大小等性质的差异，实现分离。

2.离子交换剂由________、________和可交换离子三部分组成，其中阳离子交换剂的可交换离子为________（填“正”或“负”）离子。

3.凝胶过滤层析中，分子量大的物质因无法进入凝胶颗粒内部，随流动相________（填“先”或“后”）流出；分子量小的物质进入颗粒内部，________（填“先”或“后”）流出。

4.高效液相色谱的核心部件包括________、________、色谱柱和检测器，其中色谱柱的固定相颗粒通常小于________μm。

5.亲和层析的配基需满足三个条件：与目标分子________、________且________（填“可逆”或“不可逆”）结合。

6.薄层色谱的操作步骤包括________、点样、________、显色和结果分析。

7.分配层析中，固定相可以是液体（如纸层析中的水）或________（如键合相色谱中的固定液），流动相为________（填“液体”或“气体”）。

8.衡量离子交换剂性能的重要参数有________（反映交换能力）和________（反映对不同离子的选择性）。

9.凝胶过滤层析可用于________（填“分离”或“浓缩”）不同分子量的物质，也可用于测定蛋白质的________。

三、简答题（每题8分，共40分）

1.比较吸附层析与分配层析的分离机制，并各举