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探索NADH及脱氢酶型电化学生物传感器的创新制备路径

一、引言

1.1研究背景与意义

自20世纪60年代Clark将葡萄糖氧化酶固定在氧电极上制作出第一支用于检测葡萄糖的酶电极以来，生物传感器，特别是电化学生物传感器，凭借其快速在线分析能力和高灵敏度的特点，受到了广泛关注。历经近60年的发展，生物传感器在理论研究和实际应用方面都取得了长足进步，其应用领域不断拓展，涵盖了医疗、食品、环境监测等多个重要领域。

在医疗领域，生物传感器发挥着至关重要的作用。以血糖检测为例，电化学生物传感器能够实现对血糖水平的快速、准确检测，为糖尿病患者的日常监测和治疗提供了极大的便利，有助于患者及时调整治疗方案，有效控制病情。在癌症早期诊断中，通过检测特定的生物标志物，生物传感器有望实现癌症的早期发现，从而提高患者的治愈率和生存率。

在食品领域，生物传感器可用于检测食品中的农药残留、兽药残留、微生物污染以及营养成分等。例如，在检测农药残留时，生物传感器能够快速、灵敏地检测出食品中的微量农药，保障食品安全，维护消费者的健康。同时，它还可以用于食品新鲜度的检测，确保消费者能够购买到新鲜、安全的食品。

在环境监测领域，生物传感器可用于检测水体中的重金属离子、有机污染物、生物需氧量（BOD）等指标，以及空气中的有害气体和生物气溶胶等。比如，利用生物传感器检测水体中的重金属离子，能够及时发现水体污染情况，为环境保护和治理提供科学依据。

NADH（还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）及其氧化型NAD+是活细胞中广泛存在的重要生物分子。作为一对酶辅因子，NADH/NAD+在300多种复杂的酶促反应中起关键作用，其比率是反映许多生理或病理过程整体氧化还原状态的关键指标，包括能量代谢、线粒体功能、钙稳态、基因表达、细胞死亡、胚胎发育、血流、衰老、癌症和糖尿病等。此外，NADH已广泛用于检测诊断疾病中的酶活性，包括肿瘤形成和缺血。一些专家认为，NADH对基于脱氢酶的生物传感器和生物燃料电池研究有益，可用于治疗帕金森病和抑郁症。

自然界中超过400种脱氢酶使用辅酶-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）或烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）作为生物催化反应中氢和电子的传递体。在脱氢酶系统中，氧化还原反应需要氧化型辅酶NAD+或NADP+的参与，生成还原型辅酶NADH或NADPH。研究发现，还原型辅酶NADH或NADPH是电活性物质，在一定的激发电压下，可氧化产生电流，此现象为脱氢酶型电化学生物传感器的研发奠定了理论基础。

脱氢酶型电化学生物传感器通过脱氢酶与特异的底物发生氧化还原反应，能够定量评估该特异的底物在体内的分布和代谢情况，进而直观地了解生命健康状况。例如，基于葡萄糖脱氢酶检测血糖含量，可用于诊断糖尿病及评估治疗效果；基于乳酸脱氢酶检测血乳酸含量，可用于评估患者缺氧情况，便于医师采取有效的治疗措施。

然而，目前电化学生物传感器检测NADH或NADPH面临着一些难点。首先，在电极表面直接氧化NADH或NADPH的过电位较高，这不仅导致电极容易因吸附反应产物而钝化，还容易受到其他电活性物质（如抗坏血酸、尿酸、儿茶酚胺、多巴胺以及一些药物分子）的干扰，使得检测结果的准确性难以保证。其次，制备的传感器检测NADH或NADPH的灵敏度不高，导致传感器对目标物的检测敏感度不够，难以识别低浓度的目标分子。此外，目前文献中报道的关于脱氢酶型传感器的制备方法往往包括多步修饰，或者是辅酶未预先修饰到电极表面，而是作为试剂与待测标本混合后才用于检测。虽然这些方法能够一定程度上提高传感器的性能，但也导致所制备的生物传感器未能充分体现检测快速、操作简单、现场检测的优点。

因此，研究NADH及脱氢酶型电化学生物传感器的制备方法具有重要的现实意义。通过优化制备方法，可以提高传感器的性能，包括降低过电位、提高灵敏度和选择性，减少干扰因素的影响，从而实现对NADH及相关底物的准确、快速检测。这将有助于推动生物传感器在医疗、食品、环境监测等领域的广泛应用，为保障人类健康和环境安全提供有力的技术支持。

1.2国内外研究现状

国内外众多科研团队一直致力于NADH及脱氢酶型电化学生物传感器制备方法的研究，并取得了一系列成果。在材料选择方面，碳纳米材料因其独特的电化学性质和物理性质，如高效的电催化活性、高比表面积、宏观量子隧道效应和优良的生物相容性，在电化学传感器领域得到了广泛应用。例如，Zhu等将N，N-二甲基甲酰胺分散的羧基化碳纳米管修饰到玻碳电极表面，然后将其浸入麦尔多拉蓝溶液中，吸附一段时间，得到了碳纳米管/麦尔多拉蓝修饰电极，该传感器对还原型辅酶NADH表