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2025年(生物药物制备技术(核酸药物方向))核酸药物制备试题及答案

一、单项选择题（每题1分，共20分）

1.在mRNA原液制备过程中，用于去除DNA模板的首选酶是

A.DNaseI

B.RNaseH

C.T7RNA聚合酶

D.碱性磷酸酶

答案：A

解析：DNaseI可高效水解双链或单链DNA，不降解RNA，是去除DNA模板的标准工具。

2.下列哪种修饰核苷酸最常被引入自复制RNA（saRNA）以降低先天免疫激活

A.N1-甲基假尿苷

B.5-甲基胞苷

C.2-O-甲基腺苷

D.硫代鸟苷

答案：A

解析：N1-甲基假尿苷可显著降低TLR/RIG-I识别，同时维持翻译效率，是目前临床saRNA主流修饰。

3.用于线性化质粒的限制性内切酶最好满足

A.产生5突出端

B.产生3突出端

C.产生平末端

D.产生兼容T7启动子末端的任意末端

答案：C

解析：平末端避免非模板核苷酸掺入，保证mRNA3端序列精确，是GMP级线性化金标准。

4.在脂质纳米颗粒（LNP）包封中，决定颗粒粒径最关键的工艺参数是

A.水相pH

B.有机相溶剂种类

C.微流控总流速比（FRR）

D.氮磷比（N/P）

答案：C

解析：FRR直接控制混合速率，进而决定过饱和度与成核速度，是粒径首要调控因子。

5.下列哪种检测方法可一次性完成mRNA加帽率与poly(A)尾长度测定

A.RPA

B.LC-MS/MS

C.ddPCR

D.纳米孔直接RNA测序

答案：D

解析：纳米孔可直接读取全长RNA，通过电流信号差异同时解析帽结构与poly(A)长度。

6.用于去除dsRNA副产物的纤维素亲和层析最佳结合缓冲液电导为

A.5mS/cm

B.15mS/cm

C.35mS/cm

D.55mS/cm

答案：C

解析：35mS/cm接近纤维素-dsRNA复合物临界结合盐浓度，可最大化去除dsRNA而保留目标ssRNA。

7.在体外转录（IVT）体系中，添加无机焦磷酸酶的主要目的是

A.提高RNA产量

B.抑制RNA降解

C.降低体系粘度

D.防止焦磷酸镁沉淀

答案：D

解析：焦磷酸镁沉淀会吸附T7酶并堵塞过滤膜，焦磷酸酶水解PPi为Pi，避免沉淀。

8.下列哪项不是mRNA5帽1（Cap1）结构的特征

A.鸟嘌呤N7甲基化

B.核糖2-O-甲基化位于第一个转录核苷

C.仅存在于真核生物mRNA

D.可被痘病毒帽依赖性2-O-甲基转移酶体外催化

答案：C

解析：病毒也可编码Cap1，故“仅存在于真核生物”说法错误。

9.用于定量mRNA体外表达水平的“双荧光报告”系统通常选择

A.Fluc/Rluc

B.GFP/RFP

C.YFP/CFP

D.mCherry/EGFP

答案：A

解析：Fluc（萤火虫）与Rluc（海肾）发光底物不同，可同孔检测，减少孔间误差。

10.在GMP厂房中，IVT反应罐最推荐的材质是

A.316L不锈钢

B.304不锈钢

C.哈氏合金

D.聚丙烯

答案：A

解析：316L含Mo，耐氯离子点蚀，且可电解抛光至Ra≤0.4μm，满足RNA高纯要求。

11.下列哪种辅料在-20°C下对LNP粒径稳定性贡献最大

A.海藻糖

B.甘露醇

C.聚山梨酯80

D.柠檬酸钠

答案：A

解析：海藻糖可在冻结时形成玻璃态，抑制脂质融合，是核酸LNP冷冻保护金标准。

12.用于检测mRNA翻译起始位点是否发生移码的最佳工具是

A.Westernblot

B.质谱Top-down

C.核糖体印迹测序（Ribo-seq）

D.引物延伸

答案：C

解析：Ribo-seq可定位核糖体footprints，精确判断起始位点与阅读框。

13.在saRNA复制酶编码区引入“自切割”2A肽的主要目的是

A.降低RNA二级结构

B.实现复制酶与报告蛋白等摩尔表达

C.提高RNA稳定性

D.增强核糖体进入

答案：B

解析：2A肽可在翻译时发生“核糖体跳跃”，产生独立两条肽链，确保复制酶与抗原比例恒定。

14.下列哪项不是mRNA3端poly(A)尾功能

A.增强核输出

B.提高翻译效率

C.抑制脱腺苷酸化

D.促进剪接

答案：D

解析：poly(A)主要影响输出、稳定与翻译，不直接参与剪接。

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