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苜蓿耐盐碱新征程：CMO与BADH双价基因无选择标记转化策略

一、引言

1.1研究背景

土壤盐碱化是一个全球性的环境问题，对农业生产造成了严重的危害。据统计，全球盐碱地面积约为9.54亿公顷，约占世界陆地总面积的7%。我国盐碱地面积广阔，约为9913万公顷，其中可利用的盐碱地面积约为2000万公顷。盐碱地的高盐分含量会导致土壤渗透压升高，使植物根系难以吸收水分和养分，从而影响植物的生长发育，导致农作物产量大幅下降，甚至绝收。同时，盐碱化还会导致土壤结构破坏、肥力下降，进一步加剧土地退化，威胁着土地资源的可持续利用。

苜蓿（MedicagosativaL.）作为世界上广泛种植的多年生豆科牧草，素有“牧草之王”的美誉，具有极高的经济价值和生态价值。在经济价值方面，苜蓿富含蛋白质、维生素和矿物质等营养成分，其干草中的粗蛋白含量可达15%-25%，相当于豆饼的一半，比玉米高1-1.5倍，是家畜优质的饲料来源，有助于提高家畜的产奶量、产肉量以及繁殖性能，对畜牧业的发展起着至关重要的作用。从生态价值来看，苜蓿根系发达，能深入土壤2米以上，与根瘤菌共生形成根瘤，具有强大的固氮能力，每年每公顷苜蓿可固氮150-300千克，能够有效增加土壤氮素含量，改善土壤结构，提高土壤肥力；还能有效阻挡盐分上升，降低土壤中的盐分含量，在盐碱地改良中发挥着重要作用；此外，苜蓿茂密的植被覆盖还能减少风蚀和水蚀现象，保持水土，保护生物多样性，增强生态系统的稳定性。

然而，苜蓿的生长和分布受到盐碱地的严重限制。传统育种方法虽然在一定程度上能够改良苜蓿的耐盐碱性，但存在周期长、效率低、育种资源有限等问题，难以满足农业生产对耐盐碱苜蓿品种的迫切需求。随着分子生物学和基因工程技术的迅速发展，通过基因工程手段提高苜蓿的耐盐碱性成为了研究的热点。将与耐盐相关的基因导入苜蓿中，有望培育出耐盐碱性强的苜蓿新品种，从而有效利用盐碱地资源，提高苜蓿的产量和质量，促进畜牧业的可持续发展。

胆碱单加氧酶（CMO）和甜菜碱醛脱氢酶（BADH）是植物体内合成甜菜碱过程中的关键酶。甜菜碱作为一种重要的渗透调节物质，在植物应对盐碱胁迫时发挥着关键作用。当植物遭受盐碱胁迫时，细胞内会积累甜菜碱，以调节细胞的渗透压，维持细胞的水分平衡，从而保证植物正常的生理功能。CMO基因编码的胆碱单加氧酶能够催化胆碱转化为甜菜碱醛，而BADH基因编码的甜菜碱醛脱氢酶则可将甜菜碱醛进一步氧化为甜菜碱。将CMO和BADH双价基因导入苜蓿，有望增强苜蓿合成甜菜碱的能力，从而显著提高苜蓿的耐盐碱性。

1.2研究目的与意义

本研究旨在利用农杆菌介导法，将CMO和BADH双价基因导入苜蓿，获得具有高耐盐碱性的转基因苜蓿植株，为苜蓿的遗传改良和盐碱地的开发利用提供新的种质资源和技术支持。

在农业生产方面，培育耐盐碱性强的苜蓿品种具有重要的现实意义。我国拥有大量的盐碱地资源，这些土地目前尚未得到充分有效的利用。通过提高苜蓿的耐盐碱性，使其能够在盐碱地上良好生长，不仅可以增加苜蓿的种植面积和产量，为畜牧业提供更多优质的饲料，促进畜牧业的发展，还能减少对进口苜蓿的依赖，保障国家的饲料安全。同时，种植耐盐碱苜蓿可以改良盐碱地土壤，提高土壤肥力，为后续其他农作物的种植创造条件，从而提高土地的利用率和农业生产的综合效益。

从生态环境角度来看，苜蓿具有保持水土、改善生态环境的作用。在盐碱地上种植耐盐碱苜蓿，能够增加植被覆盖度，减少土壤侵蚀和水土流失，改善生态系统的稳定性。此外，通过种植苜蓿实现盐碱地的生态修复和可持续利用，有助于缓解土地资源紧张的问题，促进生态环境的良性循环，对于实现农业可持续发展和生态文明建设具有重要的推动作用。

二、理论基础

2.1植物耐盐性与耐盐基因工程

2.1.1植物耐盐性机制

植物耐盐性是一个复杂的生理过程，涉及到植物在生理、生化和分子等多个层面的适应性变化。在生理层面，植物通过多种方式应对盐胁迫。渗透调节是植物适应盐胁迫的重要机制之一，植物细胞会主动积累一些小分子有机物质，如脯氨酸、甜菜碱、可溶性糖等，以及一些无机离子，如钾离子（K^+）等，来降低细胞内的水势，保持细胞的膨压，从而维持细胞从外界吸收水分的能力。离子平衡调节对于植物耐盐也至关重要，植物会通过离子通道和转运蛋白，如Na^+/H^+逆向转运蛋白，将细胞内过多的钠离子（Na^+）排出细胞或区隔化到液泡中，以维持细胞内离子的平衡，减少钠离子对细胞内生理生化反应的毒害作用。

在生化层面，植物会启动抗氧化防御系统来应对盐胁迫下产生的氧化损伤。盐胁迫会导致植物细胞内活性氧（ROS）的积累，如超氧阴离子（O_2^-）、过氧化氢（H_2O_2）和羟自由基（\cdotOH）等，这些ROS会