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生物科技类生物技术实验设计与操作技巧测试答案详解

一、选择题（每题2分，共20题）

说明：本部分考察基础实验原理与操作规范，结合中国生物技术行业实际应用场景。

1.在PCR实验中，引物设计时，若目标序列位于基因的内含子区域，可能导致的结果是？

A.扩增效率显著提高

B.出现非特异性条带

C.无法扩增出目的片段

D.扩增产物大小正常但测序错误

答案：C

解析：内含子区域不编码蛋白质，且存在剪接信号，直接扩增可能导致无法获得完整的外显子序列，因此难以成功扩增。

2.下列哪种方法最适合从植物叶片中提取总RNA，且能有效避免DNA污染？

A.离子交换柱法

B.酚-氯仿法

C.异硫氰酸胍法

D.CTAB法

答案：D

解析：CTAB法通过高盐浓度沉淀多糖和酚类物质，同时利用胍盐裂解细胞并抑制DNA酶活性，是植物RNA提取的经典方法。

3.在蛋白质印迹（WesternBlot）实验中，封闭液使用脱脂奶粉的主要目的是？

A.阻止抗体非特异性结合

B.提高蛋白转移效率

C.增强信号稳定性

D.消除样本中的内源性过氧化物酶

答案：A

解析：脱脂奶粉富含糖类和蛋白质，能竞争性结合抗体，减少非特异性吸附。

4.下列哪项操作最可能导致琼脂糖凝胶电泳中DNA条带弥散？

A.电压设置过高

B.溶液pH值过低

C.DNA上样量不足

D.凝胶浓度过低

答案：D

解析：低浓度凝胶（如1%或以下）会导致DNA迁移路径无序，条带弥散。

5.在细胞培养过程中，若发现细胞贴壁不牢，可能的原因是？

A.培养基pH值过高

B.培养皿表面未处理

C.细胞密度过高

D.CO?浓度不足

答案：B

解析：新购培养皿表面需用酸碱处理增强亲水性，否则细胞难以附着。

6.下列哪种酶在DNA重组中用于连接粘性末端？

A.DNaseI

B.RNA聚合酶

C.T4DNA连接酶

D.限制性内切酶

答案：C

解析：T4DNA连接酶能识别粘性末端并催化磷酸二酯键形成，是分子克隆的核心工具。

7.在ELISA实验中，使用HRP标记的二抗检测时，若背景高，可能的原因是？

A.抗体浓度过低

B.孵育时间过长

C.样本中存在内源性过氧化物酶

D.抗体与靶蛋白结合力弱

答案：C

解析：动物血清（如牛血清白蛋白）含HRP类似物，需用酶抑制剂（如过氧化氢）封闭。

8.在高通量测序（NGS）样本制备中，文库扩增的主要目的是？

A.提高测序深度

B.增加测序通量

C.增强信号灵敏度

D.均匀化模板浓度

答案：D

解析：PCR扩增可确保模板数量足够且分布均匀，避免低浓度序列丢失。

9.下列哪种方法最适合检测样品中微量蛋白的表达水平？

A.蛋白质沉淀法

B.酶联免疫吸附测定（ELISA）

C.离子交换色谱

D.毛细管电泳

答案：B

解析：ELISA通过抗体夹心法可灵敏检测ng级蛋白。

10.在基因编辑实验中，CRISPR-Cas9系统的关键组件是？

A.T7噬菌体RNA

B.Cas9蛋白与gRNA

C.λ噬菌体整合酶

D.ZFN核酸酶

答案：B

解析：gRNA引导Cas9识别靶向位点，实现切割。

二、简答题（每题5分，共4题）

说明：本部分考察实验设计逻辑与操作细节，结合中国生物医药产业（如抗体药物开发、基因治疗）需求。

11.简述从血液样本中分离白细胞的基本步骤及其原理。

答案：

1.抗凝处理：使用肝素或EDTA抗凝剂防止凝血；

2.密度梯度离心：将血液加入Ficoll-Paque或Lympholyte分层液中，离心后白细胞位于血浆与分离液界面；

3.细胞洗涤：用PBS重悬并离心去除残留血浆，重复2-3次；

原理：白细胞密度介于血浆与分离液之间，通过离心分层实现富集。

12.为什么在进行qPCR实验前需对模板进行DNA酶处理？

答案：

-qPCR检测RNA时，残留的基因组DNA会干扰定量结果（假阳性）；

-DNaseI可特异性降解DNA，避免非特异性扩增；

-特别是在检测低丰度转录本时，需彻底清除DNA污染。

13.简述WesternBlot中抗体孵育条件优化的关键因素。

答案：

-抗体浓度：1-5μg/mL为佳，过高易弥散；

-封闭时间：1-2小时（低温增强结合力）；

-孵育温度：4℃增强特异性，室温加速；

-洗涤次数：3-5次，每次5-10分钟，避免背景过高。

14.在动物细胞转染实验中，如何提高转染效率？

答案：

-试剂选择：Lipo2000（脂质体）、PEI（聚合物）或电穿孔法；

-细胞状态：处于对数生长期，避免传代过老；

-DNA浓度：1-3μg/10^6细胞；

-辅助处理