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桉树高效遗传转化体系构建及EgrBRI1基因功能解析

一、绪论

1.1研究背景

桉树（Eucalyptusspp.）作为桃金娘科（Myrtaceae）桉属（Eucalyptus）的总称，原产于澳大利亚及其附近岛屿。其具有速生丰产的特性，能在较短时间内达到成熟并实现较高的木材产量，满足日益增长的木材需求；材质优良，其木材纹理美观、结构均匀，且强度高、耐久性好，在建筑业、家具制造业以及造纸业等领域都是主要原料，为我国木材安全保障以及生态文明建设做出了巨大的贡献。同时，桉树适应性广，能够在不同的气候和土壤条件下生长，从热带到亚热带地区都有广泛种植，能耐受一定程度的干旱和贫瘠土壤，是世界四大速生造林树种之一，在全球范围内被广泛引种和栽培。

然而，传统的桉树育种方法存在诸多局限性。育种周期长，往往需要多年甚至数十年的时间才能培育出一个新品种，难以满足快速变化的市场需求和日益增长的木材需求；定向改良困难，无法精准地对桉树的特定性状进行改良；桉树杂合度高，使得遗传背景复杂，增加了育种难度；物种间杂交困难，限制了通过杂交育种获得优良性状组合的可能性。这些因素严重制约了桉树遗传育种的发展。

近年来，植物基因工程技术，如组织培养、遗传转化等，在林木育种中得到了广泛应用，为桉树育种提供了新的途径。通过基因工程技术，可以实现外源基因的导入，从而定向改良桉树的性状，如提高抗病性、抗逆性，改善木材品质等。遗传转化是将外源基因导入植物细胞并整合到基因组中的过程，建立高效的桉树遗传转化体系是利用基因工程技术进行桉树育种的关键。但目前已建立的桉树遗传转化体系仍存在效率低、稳定性差、无法重复等问题，严重制约了桉树的遗传改良和基础研究。

油菜素内酯（Brassinosteroid，BR）作为一种重要的植物激素，在植物生长发育的各个方面都发挥着至关重要的作用，如促进细胞伸长和分裂、调控植物株型、提高植物抗逆性等。BRI1（BrassinosteroidInsensitive1）基因是油菜素内酯信号转导途径中的关键受体基因，其编码的受体蛋白能够感知油菜素内酯信号，并启动下游的信号转导过程，从而调控植物的生长发育。在拟南芥、水稻、杨树等植物中，对BRI1基因的功能已有较为深入的研究，但在桉树中，关于BRI1基因（EgrBRI1）的功能研究尚未见报道。

因此，建立高效的桉树遗传转化体系，对于利用基因工程技术改良桉树性状具有重要意义。同时，深入研究EgrBRI1基因的功能，有助于揭示桉树生长发育的分子机制，为桉树的遗传改良提供理论基础和基因资源。本研究旨在建立高效的桉树遗传转化体系，并对EgrBRI1基因的功能进行初步鉴定，为桉树的遗传育种提供技术支持和理论依据。

1.2国内外研究进展

1.2.1桉树遗传转化研究

桉树遗传转化研究始于上世纪，自1987年，Fillatti等首次报道利用根癌农杆菌介导法将nptⅡ基因转入巨桉细胞，获得转基因愈伤组织，开启了桉树遗传转化研究的大门。此后，国内外众多学者围绕桉树遗传转化展开深入探索，在转化方法、外植体选择、影响因素优化等方面取得一定进展。

在转化方法上，农杆菌介导法因操作简易、成本低廉、拷贝数低、基因沉默现象少以及能转化较大片段DNA等优点，成为桉树遗传转化的主要方法，包括根癌农杆菌介导法和发根农杆菌介导法。其中，根癌农杆菌介导法相对成熟，在多个桉树品种中应用；发根农杆菌介导的毛状根转化体系研究较少，但为桉树遗传转化提供新思路。基因枪法也有应用，可克服农杆菌宿主范围限制，将外源基因导入桉树细胞，但存在成本高、转化效率低、易造成基因多拷贝插入等问题。

外植体选择对遗传转化至关重要，不同外植体再生能力和对农杆菌敏感性不同，影响转化效率。目前，常用外植体有叶片、茎段、下胚轴、子叶等。华中农业大学丁寄花教授团队对12个桉树物种（26个基因型）的两种外植体（下胚轴和茎段）的再生与转化进行系统分析，发现以下胚轴为外植体时，许多基因型再生效率高达80%；以茎段为外植体时，部分基因型再生效率超过50%，且转化效率高度依赖外植体类型。

影响桉树遗传转化效率的因素众多，包括基因型、农杆菌菌株、培养基成分、激素种类及浓度、侵染时间和共培养条件等。不同桉树基因型遗传背景差异大，对转化反应不同，部分基因型转化效率高，部分则难以转化。农杆菌菌株毒性和侵染能力不同，对转化效率影响显著，如LBA4404、EHA105等菌株在桉树遗传转化中较常用。培养基成分和激素配比影响外植体生长和分化，合适的培养基和激素组合可提高转化效率。侵染时间和共培养条件也需优化，过长或过短的侵染时间、不适宜的共培养温度和时间都会降低转化效率。

尽管取得一定成果，但现有桉树遗传转化体系仍存在不足。转化效率普遍较低，多数研究中转化