植物基因工程优秀课件.pptVIP

植物基因工程优秀课件;转基因植物(Transgeneplant)是拥有来自其他物种基因的植物。该基因变化过程可以来自不同物种之间的杂交，但现在该名词更多的特指那些在实验室里通过重组DNA技术人工插入其他物种基因以创造出拥有新特性的植物。

?????;;第一节植物基因的克隆与分离;二、根据mRNA特异分离目的基因;3.cDNA代表性差示分析(representationaldifferenceanalysis)技术，cDNARDA;;Neurospheres(NS)areculturedbytheusualmethods.Sisterculturesaredifferentiatedfor24hoursandeacharesubjectedtorepresentationaldifferenceanalysis(RDA)withtworoundsofsubtraction.Thesubtractedproductsarethenclonedintoplasmids,propagatedinbacteria,andarrayedathighdensityontoaglassslide.ThecustommicroarrayisthenscreenedwithamplifiedcomplementaryDNAderivedfromadifferentsetofneurosphereanddifferentiatingcell(DC)cultures.Thegenesthatareverifiedtobeenrichedinneurosphereculturesarethensubjectedtosequenceanalysisandfurtherscreeningbyinsituhybridization.Cy3andCy5aregreenandredfluorescentdyes,respectively.bFGF,basicfibroblastgrowthfactor;E17,embryonicday17;P0,dayofbirth;P1ctx,postnatalday1cortex.;三、根据DNA的插入作用分离目的基因;转座的结果是使被转入的基因失活，从而有效地诱导产生表型突变株。然后构建一个对应于突变株的基因库，用作标签的转座子作为探针从基因库中筛选相对应的克隆，分离得到相对应于变异的基因，这就是转座子标签克隆基因。;;;（1）采取农杆菌介导等适当的转化方法把转座子导入目标生物体；

（2）转座子在目标生物体内的初步定位；

（3）转座子插入突变的鉴定及分离；

（4）转座子在目标生物体内的活动性能检测；

（5）对转座子插入引起的突变体，利用转座子序列作探针，分离克隆目的基因。;Transposontagging,expressionandsequenceofthera1gene;转座子标签法不但可以通过上述转座突变分离基因，而且当转座子作为外源基因通过农杆菌介导等方法导入植物时，还会由于T-DNA（transferredDNA）整合到染色体中引起插入突变，并进而分离基因，因此大大提高了分离基因的效率。;SystemsforinsertionalmutagenesisinArabidopsis;2.T-DNA标签法;Reversegenetics:

Top,genestructureofFASCIATA1withexonsinblueandintronsinyellow.ReddenotesabacterialT-DNAthathasinsertedintothegene.

Bottom,mutantslackingthewild-typeFAS1genehavealtereddevelopment.;;第二节植物基因工程研究常用的基因;植物细胞转化实验中，应选择何种选择标记基因：

1)其代谢产物不干扰寄主细胞的正常的新陈代谢活动；

2)为转化细胞提供抵抗选择剂抑制作用的能力；

3)选择培养基中所用的抗代谢物对转化细胞再生植株的生长，不应有明显的影响。;标记基因;卡那霉素是由卡那霉素链霉菌(Streptomyceshanamyceticu)产生的一种氨基糖苷类抗菌素，新霉素是弗氏链霉菌(Streptompc