野生动物腺病毒纳米孔测序快速鉴定技术规程.docxVIP

ICS11.220CCSB44

T/YNSOZ

云南省动物学会团体标准

T/YNSOZ003—2025

野生动物腺病毒纳米孔测序快速鉴定技术规程

Technicalregulationforrapiddetectionofwildanimaladenovirusesbasedonnanoporesequencing

2025-12-02发布2025-12-10实施

云南省动物学会发布

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I

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4缩略语 2

5野生动物腺病毒纳米孔测序快速鉴定试验步骤 2

5.1野生动物样本核酸提取 2

5.2病毒DNA文库构建 3

5.3病毒DNA测序 3

5.4病毒种类鉴定及全基因组信息获取 3

附录A（资料性）腺病毒纳米孔测序鉴定流程 5

附录B（资料性）主要仪器及耗材试剂 6

附录C（资料性）DNA样品提取方法 8

附录D（资料性）腺病毒DNA建库 10

附录E（资料性）腺病毒DNA测序体系流程 12

附录F（资料性）实时序列鉴定平台搭建使用流程 13

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II

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本文件由中国科学院昆明动物研究所提出。

本文件由云南省动物学会（YNSOZ）归口。

本文件主要起草单位：中国科学院昆明动物研究所。

本文件主要起草人：杨丽萍、杨兴娄、李丰邑、赵锴。

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1

野生动物腺病毒纳米孔测序快速鉴定技术规程

1范围

本文件规定了野生动物样本中腺病毒纳米孔测序鉴定技术流程。

本文件适用于野生动物腺病毒的快速、分类鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

GB/T40974核酸样本质量评价方法

LY/T2360陆生野生动物疫病危害性等级划分

GB/T40458用于病原微生物高通量检测的核酸提取技术规范

GB/T27025检测和校准实验室能力的通用要求

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

野生动物wildanimal

自然环境下生长且未被驯化的动物，包括天然分布在自然环境中的动物种或其种群，以及出于保护、管理和科研等目的人工驯养但尚未形成明显遗传变异的动物种或其种群。

3.2

腺病毒adenovirus,AdV

无包膜的双链DNA病毒，直径为90～100nm的颗粒，基因组是线性双链DNA，长度约为26～48kb，基因组两端各有长约100bp的反向重复序列。腺病毒科成员可感染包括人类在内的各种脊椎动物。3.3

腺病毒DNA样品AdVDNAsamples

利用野生动物的组织、血液、咽拭子、肛拭子等样品进行核酸提取所获得的腺病毒基因组DNA。3.4

DNA文库构建DNAlibraryconstruction

将提取或纯化的基因组双链DNA，经修复连接测序接头后磁珠纯化完成文库的构建，从而实现在纳米孔基因测序平台进行测序的文库。

3.5

纳米孔测序nanoporesequencing

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2

纳米孔测序是一种基于单分子实时检测的测序技术，其核心原理是通过监测生物大分子（如DNA、RNA）穿过纳米孔时引起的电流变化来识别碱基序列。

3.6

病毒DNA序列分析viralDNAsequenceanalysis

通过纳米孔测序仪对病毒DNA进行测序，得到的DNA序列与已知病毒序列数据库比对来确定病毒的类型。

3.7

测序接头sequencingadaptercomplex

在纳米孔测序中，测序接头是一段人工设计的、连接在待测D