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猪β防御素2与猪γ干扰素在毕赤酵母中的融合表达及活性差异解析

一、引言

1.1研究背景与意义

在养猪业中，疾病的防控始终是影响产业发展的关键因素。猪β防御素2（Porcineβ-defensin2，PBD-2）和猪γ干扰素（Porcineinterferon-γ，PoIFN-γ）作为猪体内重要的免疫活性物质，在猪的健康维护及养殖产业中发挥着不可或缺的作用。

PBD-2是一种内源性抗菌肽，属于防御素家族。它广泛分布于猪的呼吸道、消化道等上皮组织中，是猪先天性免疫系统的重要组成部分。PBD-2具有广谱的抗菌活性，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌以及真菌等多种病原体均有抑制作用。例如，研究表明PBD-2对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等常见病原菌具有显著的抑菌效果，能够有效抑制这些细菌的生长和繁殖。此外，PBD-2还具有免疫调节功能，它可以促进免疫细胞的活化和增殖，增强机体的免疫应答能力，从而提高猪对病原体的抵抗力。同时，PBD-2在促进仔猪生长、减少腹泻等方面也具有积极作用，对提高养猪业的经济效益具有重要意义。

PoIFN-γ是一种由活化的T淋巴细胞和自然杀伤细胞（NK细胞）产生的细胞因子，在猪的免疫防御中扮演着核心角色。PoIFN-γ具有强大的抗病毒活性，它能够诱导细胞产生抗病毒蛋白，如蛋白激酶R（PKR）、2,5-寡腺苷酸合成酶（OAS）等，这些抗病毒蛋白可以通过不同的机制抑制病毒的复制和扩散，从而有效控制病毒感染。例如，在猪感染猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）时，PoIFN-γ能够显著抑制病毒在细胞内的复制，减轻病毒对机体的损害。此外，PoIFN-γ还具有免疫调节作用，它可以增强巨噬细胞、自然杀伤细胞等免疫细胞的活性，促进抗原递呈细胞（APC）的功能，调节T细胞和B细胞的增殖与分化，从而全面提升机体的免疫功能。

然而，单独使用PBD-2或PoIFN-γ在应对复杂的猪病感染时，往往存在一定的局限性。将PBD-2与PoIFN-γ进行融合表达，有望获得同时具有抗菌、抗病毒和免疫调节等多种功能的新型生物制剂。这种融合蛋白可能通过两种蛋白的协同作用，发挥出更强大的生物学活性，为猪病的防治提供新的策略和手段。融合蛋白中的PBD-2可以直接作用于细菌等病原体，发挥抗菌作用，同时激活机体的先天性免疫反应；而PoIFN-γ则可以针对病毒感染，诱导细胞产生抗病毒状态，增强机体的抗病毒能力，同时调节适应性免疫反应。两者的协同作用可能产生1+12的效果，更有效地应对猪病的挑战。

开发基于PBD-2和PoIFN-γ融合表达的新型生物制剂，对于推动养猪业的健康发展具有重要的现实意义。它不仅可以减少抗生素的使用，降低细菌耐药性的产生，保障动物健康和食品安全；还可以提高猪的免疫力，降低猪病的发生率和死亡率，减少养殖成本，提高养猪业的经济效益和社会效益。因此，开展PBD-2与PoIFN-γ在毕赤酵母中的融合表达及生物学活性比较研究，具有重要的理论和实践价值。

1.2国内外研究现状

猪β防御素2和猪γ干扰素的研究一直是兽医领域的热点。在猪β防御素2方面，国内外学者对其基因结构、表达调控、抗菌机制等进行了广泛研究。研究发现，猪β防御素2基因在不同组织中的表达存在差异，且受到多种因素的调控，如病原体感染、细胞因子刺激等。在抗菌机制方面，猪β防御素2主要通过破坏细菌细胞膜的完整性，导致细菌内容物泄漏，从而发挥抗菌作用。

在猪γ干扰素的研究中，重点集中在其基因克隆、表达纯化以及抗病毒活性和免疫调节机制的探索。目前，已经成功克隆出猪γ干扰素基因，并在多种表达系统中实现了表达，如大肠杆菌、毕赤酵母等。研究表明，猪γ干扰素能够通过激活JAK-STAT信号通路，诱导细胞产生一系列抗病毒蛋白，从而抑制病毒的复制。

关于猪β防御素2和猪γ干扰素的融合表达，已有一些相关研究报道。这些研究主要采用基因工程技术，将两者的基因进行串联融合，然后导入合适的表达系统中进行表达。然而，目前的研究仍存在一些不足。一方面，融合蛋白的表达效率和稳定性有待提高；另一方面，对于融合蛋白的生物学活性及作用机制的研究还不够深入，尤其是在体内环境下的活性和作用效果尚不明确。

本研究正是基于当前研究的不足，以毕赤酵母为表达系统，深入探究猪β防御素2与猪γ干扰素的融合表达条件，优化表达工艺，提高融合蛋白的表达量和稳定性。同时，系统比较融合蛋白与单独表达的猪β防御素2和猪γ干扰素的生物学活性，进一步明确融合蛋白的优势和作用机