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小菜蛾PxEH基因特性及其对Cry2Ab杀虫效应的影响研究

一、引言

1.1小菜蛾研究背景

小菜蛾（Plutellaxylostella），属鳞翅目菜蛾科，作为一种世界性迁飞害虫，对全球农业生产，尤其是十字花科蔬菜种植造成了严重威胁。小菜蛾具有极强的繁殖能力，在适宜条件下，其种群数量可迅速增长。在25°C时，其生命周期仅14天，但一年可发生多代，在中国，黑龙江地区每年发生3至4代，而广东广州可达18至20代，海南则高达22代。这种高繁殖率使得小菜蛾能够在短时间内对蔬菜作物造成大面积危害。

小菜蛾主要以十字花科植物为食，包括甘蓝、青花菜、白菜、油菜、萝卜等常见蔬菜。初龄幼虫仅取食叶肉，留下表皮，在菜叶上形成透明小斑，俗称“开天窗”；3至4龄幼虫能将菜叶食成孔洞与缺刻，严重时全叶几近被食成网状。在苗期，小菜蛾常聚集在中心叶为害，影响蔬菜包心；在留种株上，会损害嫩茎、幼荚及籽粒，严重影响蔬菜的产量与品质。据统计，全球每年因小菜蛾危害造成的经济损失高达数十亿美元，在中国，每年用于小菜蛾防治的费用也相当可观，且因防治不当导致的蔬菜减产损失巨大。

长期以来，针对小菜蛾的防治主要依赖化学农药。但化学农药的大量使用，不仅使小菜蛾产生了极强的抗药性，对多种传统农药的抗性倍数不断攀升，还破坏了生态平衡，对非靶标生物造成伤害，导致环境污染问题日益严重。此外，农药残留也对食品安全构成威胁，影响人类健康。因此，寻找高效、安全、可持续的小菜蛾防治方法迫在眉睫。研究小菜蛾基因，对于深入了解其生长发育、繁殖、代谢等生理过程的分子机制，开发基于基因层面的绿色防控技术，如RNA干扰、基因编辑等具有重要意义，有望为小菜蛾的可持续治理提供新的策略和方法。

1.2PxEH基因研究现状

PxEH基因在小菜蛾的生理过程中发挥着关键作用。它所编码的酯酶（Esterase，EH）参与了小菜蛾体内多种重要的代谢反应，尤其是对酯类物质的水解过程。酯类物质在昆虫体内广泛存在，参与了诸如信号传导、能量代谢、物质运输等多个生理过程。PxEH基因表达的酯酶能够特异性地识别并水解这些酯类物质，调节其在昆虫体内的浓度和活性，从而影响小菜蛾的生长发育、繁殖和对环境的适应能力。

在小菜蛾的生长发育过程中，PxEH基因的表达水平呈现动态变化。在幼虫阶段，随着龄期的增加，PxEH基因的表达量逐渐上升，这可能与幼虫不断摄取食物，需要更多酯酶来参与消化和代谢过程有关。而在化蛹和羽化阶段，PxEH基因的表达又会发生显著变化，以适应昆虫在不同发育阶段的生理需求。例如，在化蛹过程中，酯酶可能参与了旧组织的降解和新组织的构建；在羽化后，酯酶则可能在昆虫的生殖和取食行为中发挥作用。

研究还发现，PxEH基因与小菜蛾的抗药性密切相关。当小菜蛾长期接触化学农药时，PxEH基因的表达会发生改变。一些研究表明，在抗性小菜蛾种群中，PxEH基因的表达量明显上调，这使得小菜蛾能够合成更多的酯酶，从而加速对农药的水解和代谢，降低农药在昆虫体内的有效浓度，导致小菜蛾对农药产生抗性。此外，PxEH基因的突变也可能影响酯酶的结构和功能，进而改变小菜蛾对农药的敏感性。

尽管目前对PxEH基因已有一定的研究，但仍存在许多未知领域。例如，PxEH基因的表达调控机制尚未完全明确，哪些转录因子参与了PxEH基因的调控，以及环境因素如何影响其表达等问题都有待进一步研究。此外，PxEH基因与小菜蛾其他基因之间的相互作用关系也尚不清晰，这些研究空白限制了我们对小菜蛾生理机制的深入理解，也为基于PxEH基因的小菜蛾防治策略的开发带来了挑战。

1.3Cry2Ab杀虫蛋白概述

Cry2Ab杀虫蛋白来源于苏云金芽孢杆菌（Bacillusthuringiensis，Bt），是在芽孢形成过程中产生的一种δ-内毒素伴胞晶体蛋白。在Bt菌的生长周期中，当环境条件适宜时，菌体大量繁殖；当进入芽孢形成阶段，便会合成Cry2Ab蛋白，并以晶体形式存在于芽孢周围。

其杀虫机制独特而复杂。当小菜蛾等昆虫取食含有Cry2Ab蛋白的食物后，该蛋白在昆虫中肠的碱性pH环境下被溶解，随后蛋白的N-末端和C-末端被碱性蛋白酶消化，从而将原毒素转变成活性片段。这些活性片段能够与昆虫中肠上皮细胞膜上的特异性受体结合，然后插入肠膜，导致细胞膜出现穿孔病灶。细胞膜的完整性遭到破坏后，膜内外的渗透压变化及pH平衡被扰乱，昆虫的消化过程无法正常进行，最终因营养摄取受阻和生理功能紊乱而死亡。

Cry2Ab蛋白对小菜蛾具有较高的毒力。研究表明，经胰蛋白酶活化后的Cry2Ab蛋白，对小菜蛾的LC50（半数致死浓度）可达到0.0103μg/mL。这使得Cry2A