光学显微镜的操作微生物形态观察实验报告.pdfVIP

实验一

《光学显微镜的操作及微生物形态观察》

标准实验报告

适用专业：环境工程

江苏大学生物与化工学院环境工程系

2021年8月

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一、实验目的

1.了解光学显微镜的结构、原理，掌握光学显微镜的操作和保养方法。

2.观察微生物的个体形态，学会生物图的绘测。

二、实验要求

1．遵守实验室安全制度，听从指导教师安排；

2．认真听讲，不懂就问；

3．完成实验报告

三、实验仪器和材料

1．光学显微镜、擦镜纸、香柏油或液体石蜡、二甲苯

2．微生物示范片：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌（或枯草芽孢杆菌）

四、显微镜的结构、光学原理及其操作方法

（一）显微镜的结构和光学原理

显微镜分机械装置和光学系统两部分。

1．机械装置

（1）镜筒：镜筒上端装目镜，下端接转换器。镜筒有单筒和双筒两种。单筒有直

立式（长度为160mm）和后倾斜式（倾斜45°）。双筒全是倾斜式的，其中一个筒有屈

光度调节装置，以备两眼视力不同者调节使用。两筒之间可调距离，以适应两眼宽度不

同者调节使用。

（2）转换器：转换器装在镜筒的下方，其上有3个孔，有的有4个或5个孔。不

同规格的物镜分别安装在各孔上。

（3）载物台：戴物台为方形（多数）和圆形的平台，中央有一光孔，孔的两侧各

装1个夹片，载物台上还有移动器（其上有刻度标尺），可纵向和横向移动，移动器的

作用是夹住和移动标本用。

（4）镜臂：镜臂支撑镜筒、载物台、聚光器和调节器。镜臂有固定式和活动式（可

改变倾斜度）两种。

（5）镜座：镜座为马蹄形，支撑整台显微镜，其上有反光镜。

（6）调节器：调节器包括大、小螺旋调节器（调焦距）各一个。可调节物镜和所

需观察的物体之间的距离。调节器有装在镜臂上方或下方的两种，装在镜上方的是通过

升降镜臂来调焦距，装在镜臂下方的是通过升降载物台来调焦距，新式显微镜多半装在

镜臂的下方。

2．光学系统及其光学原理

（1）目镜：每台显微镜备有3个不同规格的目镜，例如，5倍（5×）、10倍（10×）

2

和15倍（15×），高级显微镜除了上述三种外，还有20倍（20×）的。

（2）物镜：物镜装在转换器的孔上，物镜有低倍（8×、10×、20×三种）、高倍（40×

或45×）及油镜（100×）。物镜的性能由数值孔径（Numeri-calAperture，N.A.）决定，

数值孔径=n.sinα/2，其意为玻片和物镜之间的折射率乘上光线投射到物镜上的最大夹角

的一半的正弦。光线投射到物镜的角度越大，显微镜的效能越大，该角度的大小决定于

物镜的直径和焦距。n是影响数值孔径的因素，空气的折射率n=1，水的折射率n=1.33，

香柏油的折射率n=1.52，用油镜时光线入射α/2为60°，则sin60°=0.87。

以空气为介质时：N.A.=l×0.87=0.87

以水为介质时：N.A.=1.33×0.87=1.16

以香柏油为介质时：N.A.=1.52×0.87=1.32

显微镜的性能还依赖于物镜的分辨率，分辨率即能分辨两点之间的最小距离的能

力。分辨率用表示，δδ0.61λ/N.A（为波长），分辨率与数值孔径成正比，与被长λ

成反比。增大数值孔径，缩短波长可提高显微镜的分辨率，使目的物的细微结构更清晰

可见。事实上可见光的波长（0.38～0.7）是不可能缩短的，只有靠增大数值孔径来

μm

提高分辨率。

物镜上标有：N．A．1．25、100×、“OI”、160/0.17、0.16等字样，其中N．A．1.25

为数值孔径，100×为放大倍数，“160/0.17”中160表示镜筒长，0.17表示要求盖玻片

的厚度。“OI”表示油镜，（即OilImmersion），0.16为工作距离。