钝齿棒杆菌黄素血红蛋白Hmp在L-精氨酸合成中的作用.docxVIP

钝齿棒杆菌黄素血红蛋白Hmp在乙.精氨酸合成中的作用

孙聪陈鑫上官春雨张显杨套伟徐美娟**饶志明**江南大学生物工程学院.工业生物技术教育部重点实验室无锡214122

摘要钝齿棒杆菌(Corynehacteriumcrenatum)SYPA5-5是本实验室选育的一株心精氨酸高产菌，基于前期转录组和蛋白组数据分析，发现黄素血红蛋白(flavohaemoglobin,Hmp)在高氮源相对于低氮源条件下表达水平上调，进一步研究Hmp的抗纸化胁迫功能和在4精级酸合成中的作用。构建了加叩过表达和敲除菌株，首先以Hmp蛋白为研究对象，分析Hmp的圆二色谱结构，用SWISS-MODEL建模分析，测其NAD(P)H氧化酶酶活，验证了Hmp的结构与功能。接下来研究Hn】p与氧化应激之间的关系，首先测定发酵过程胞内活性氧(reactiveoxygenspecies.ROS)水平以及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)酶活，最后通过5-L发酵罐扩大发酵体系来探究Hmp在精氨酸合成中的作用。钝齿棒杆菌Hmp在发酵过程有助于清除活性氧，提高抗织化酶类活性，促进菌体生长代谢和提高目标代谢产物的枳累。通过检测发酵过程的细胞干重、葡萄糖含量和精氨酸产宣，发现/也沪过表达菌株Cc-hmp的心精氨酸产景和得率相比于原始菌株Cc5-5分别提高19.7%和29.6%,如，伊敲除菌株Cc-Ahmp的心精氨酸产量和得率相比于原始菌株Cc5-5分别减少37.9%和14.8%。本研充说明高氮高溶氧条件下，使用发酵法生产精氨酸的过程中，氧化应激的产生和带来的氧化损伤不可防止，Hmp可以有效抵抗胞内氧化应激，改善胞内的氧化还原状态，维持一个良好的胞内环境，从而提高心精氨酸产量。

关键词心精氨酸；钝齿棒杆菌：黄素血红蛋白Hmp；氧化应激TheroleofCorynehacteriumcrenatumflavohaemoglobinHmpinthesynthesisofL-arginine

SUNCong,CHENXin,SHANGGUANChunyu,ZHANGXian,YANGTaowci,XuMcijuan*,RAOZhimingKeylaboratoryofIndustrialBiotechnologyofMinistryofEducation,SchoolofBiotechnology.JiangnanUniversity9Wuxi214122,

ChinaAbstractTranscriptonieandproteoineanalysisofthehighL-arginineproducingCorynebacteriumcrenatumSYPA5-5strainearliercharacterizedinourlaboratoryrevealedthatunderhighnitrogenconcentrations,(helevelofhmphadincreasecomparedtothatatlownitrogenconcentrationsintranscriptionlevel.ThestudyfoundthatHmpfunctionsasastressanti-oxidunt,andfurtherexploreditsroleinthesynthesisofL-argininc.So,Wefirstlyconstructedthehmpoverexpressionandknockoutstrains.ThenwenextanalyzedthecirculardichroismstructureofHmp,modeledproteinstructureusingSWISS-MODELandmeasureditsNAD(P)Hoxidaseactivity,priortoverifyingitsstructureandfunction.Next,westudiedtherelationshipbetweenHmpandoxidativestress,bymeasuringROSlevels,superoxidedismutase(SOD)andcatalase(CAT)enzymeactivitiesduringfermentation,andfinallyexpandedthe