3.2基因工程的基本操作程序 高二生物课件（人教版2019选择性必修3）.pptxVIP

3.2基因工程的基本操作程序

Bt基因Bt抗虫蛋白表达与表面受体结合细胞膜穿孔破坏细胞渗透平衡最终导致昆虫停止取食而死亡昆虫肠上皮细胞传统的杂交育种方法可以培养出抗虫棉吗？×导入棉花细胞培育抗虫棉基因工程培育转基因抗虫棉一般需要哪些步骤?

苏云金杆菌与载体拼接普通棉花（无抗虫特性）棉花细胞抗虫棉提取表达Bt基因导入Bt基因重组DNA分子培育转基因抗虫棉的简要过程1.目的基因的筛选与获取2.基因表达载体的构建3.将目的基因导入受体细胞4.目的基因的检测与鉴定

一、目的基因的筛选与获取(1)概念：在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。(2)实例：与生物抗逆性、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关的基因。主要指的是编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子。1.目的基因资料：苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌伴胞晶体蛋白（Bt抗虫蛋白），破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。科学家将“杀虫基因”转入棉花中，棉花产生Bt抗虫蛋白抵抗虫害。目的基因(Bt抗虫蛋白基因，简称:Bt基因)那么，如何筛选目的基因呢？

2.筛选合适的目的基因（1）方法：从相关的___________和___________的基因中进行筛选是较为有效的方法。（2）实例：已知结构功能清晰Bt抗虫蛋白基因（Bt基因）的筛选过程用苏云金杆菌（Bt）制成的生物杀虫剂，广泛用于防治棉花虫害对Bt基因的表达产物——Bt抗虫蛋白有较为深入的了解：苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌伴孢晶体蛋白（Bt抗虫蛋白），破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。苏云金杆菌的杀虫作用与Bt基因有关掌握了Bt基因的序列信息Bt基因是培育转基因抗虫棉较为合适的目的基因

测序技术序列数据库序列比对工具随着测序技术的发展，以及序列数据库（GenBank）、序列比对工具（如BLAST）等的应用，越来越多的基因的结构和功能为人们所知，为找到合适的目的基因提供了更多的机会和可能。DNA测序仪核苷酸序列比对氨基酸序列比对美国国家生物信息中心测定核酸和蛋白质序列以碱基顺序或氨基酸残基顺序为基本内容的分子生物信息数据库把感兴趣的序列跟已经存在的序列数据库进行比较的工具。通过比对识别相关的序列，从而能获得目的基因和蛋白质的功能。明确了目的基因后，该怎么获得它呢？

（1）人工合成目的基因。（2）从基因文库中获取目的基因。（3）常用PCR特异性地快速扩增目的基因。基因文库基因组文库：包含某生物全部基因部分基因文库：主要是cDNA文库，包含某生物部分基因在明确目的基因碱基序列的基础上，利用DNA合成仪自动化合成所需的DNA片段。3.获取目的基因的方法

4.利用PCR获取和扩增目的基因（1）概念：PCR是聚合酶链式反应的缩写。它是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。（2）原理：DNA半保留复制（3）操作环境：体外复制（PCR扩增仪/PCR仪）。（4）目的：对目的基因的核苷酸序列进行大量复制。（5）优点：可以在短时间内大量扩增目的基因。

DNA复制的条件:③能量：亲代DNA的两条链4种游离的脱氧核苷酸解旋酶、DNA聚合酶由细胞代谢提供的ATP①模板：②原料：④酶：体外用高温代替体外需用耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）4.利用PCR获取和扩增目的基因⑤其他条件：引物、一定的缓冲液、控制温度（一般会加Mg2+，激活DNA聚合酶）在PCR过程中实际加入的为dNTP（即dATP、dGTP、dTTP、dCTP），既可作原料，又能提供能量。

思考讨论：什么是引物？引物的作用是什么？（1）定义：引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。（用于PCR的引物长度通常为20-30个核苷酸）（2)作用：引物为DNA聚合酶提供了游离的3’端，使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始拼接单个的核苷酸。解旋酶由于DNA双链是反向平行的，所以需要2种引物。引物结合在模板链的3’端3’5’5’3’3’5’5’3’设计引物的依据是？已知目的基因两端（3’端）的部分核苷酸序列，以便根据该序列合成引物。

图中是PCR扩增技术相关过程，请思考回答下列问题：（1）图2是某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理，请分别说明理由。第1组：引物Ⅰ和引物Ⅱ局部发生而失效。第2组：引物Ⅰ′后会出现局部而失效。碱基互补配对自身折叠碱基互补配对每种引物内部不能发生局部碱基互补配对两种引物之间不能在局部发生碱基互补配对思考讨论

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