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miRNA干扰FASN表达对骨肉瘤细胞生物学行为的影响：体外实验探究与机制解析

一、引言

1.1研究背景与意义

骨肉瘤作为一种起源于间叶组织的原发性恶性骨肿瘤，严重威胁着人类的健康。在青少年群体中，它的发病率约为百万分之三，好发于股骨远端、胫骨近端等生长活跃的部位。骨肉瘤恶性度极高，早期就容易发生转移，并且对化疗具有较强的耐受性，这些特性使得患者的预后情况普遍较差。临床上，治疗骨肉瘤常常需要进行截肢手术，即便在某些条件下能够保留肢体，肢体功能也会大打折扣，无法达到患者及家属的期望。而且，骨肉瘤患者的生存率较低，确诊患者中约30%的生存期不超过5年，给患者及其家庭带来了沉重的身心负担和经济压力。若不及时治疗，骨肉瘤不仅会持续增大，破坏骨组织，严重时导致患者死亡，还可能发生肺脏、肝脏等远处脏器转移，进一步危及生命。目前，骨肉瘤的主要治疗手段为手术及化疗综合性治疗，虽然随着医学科技的进步，患者的五年生存率有所提高，保肢率也显著提升，但寻找新的治疗方法仍然是医学领域亟待解决的重要问题。

微小核糖核酸（miRNA）是一类长度为21-23个核苷酸的调控性小RNA分子，虽自身不编码蛋白质，却能通过mRNA剪切和抑制蛋白质翻译两种方式，负性调控其靶基因，参与细胞的增殖、凋亡、分化、代谢，以及个体发育和病毒感染等多种生理过程。研究表明，miRNA在肿瘤的发生与发展中起到关键作用，既可以充当抑癌基因，也可能表现为致癌基因。脂肪酸合酶（FASN）基因在肿瘤发生、发展、侵袭与转移中也扮演着重要角色，其在多种肿瘤细胞中的表达水平与肿瘤侵袭和转移密切相关。然而，miRNA干扰FASN表达对骨肉瘤细胞生物学行为的影响尚未得到充分研究，深入探究这一机制，将有助于揭示骨肉瘤的发病机制，为骨肉瘤的早期诊断、治疗和预防开辟新的路径，具有重要的理论意义和临床应用价值。

1.2国内外研究现状

在骨肉瘤与miRNA的研究方面，国内外学者取得了诸多成果。国内研究如魏任雄等人提取7例骨肉瘤组织和正常骨组织的RNA，利用microRNA芯片分析，筛查出骨肉瘤中上调基因28个，下调基因26个，其中上调＞2.5倍的miRNA基因有5个，下调＞2.5倍的有9个，初步建立了骨肉瘤的miRNA基因表达谱，为后续研究提供了理论基础。高杰等以SOSP-9607细胞为对象，通过一系列实验确定了miRNA的表达情况，并对部分miRNA进行验证，发现一些实体瘤相关及预测的miRNA在SOSP-9607细胞和成骨肉瘤组织中均有表达。国外也有众多研究表明，miRNA参与多种肿瘤的发生、发展，与人类骨肉瘤的发生、发展以及侵袭转移等密切相关，发挥着癌基因或抑癌基因的作用。

在FASN与骨肉瘤的研究中，有研究致力于探索FASN基因对骨肉瘤侵袭和转移的促进作用及其机制。通过收集骨肉瘤患者临床资料，分析FASN基因表达情况，建立FASN基因过表达或靶向抑制的骨肉瘤细胞系，检测其对细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响，并研究FASN基因对骨肉瘤细胞内信号转导通路的调控，如Wnt、PI3K/AKT等通路，为骨肉瘤的治疗和预防提供参考。

然而，当前研究仍存在不足。对于miRNA与FASN基因在骨肉瘤中的相互作用机制研究还不够深入，尤其是miRNA干扰FASN表达后对骨肉瘤细胞生物学行为的具体影响，包括对细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭等方面的影响，尚未形成系统全面的认识，这也为后续研究指明了方向。

1.3研究目的与内容

本研究旨在深入探究miRNA干扰FASN表达对骨肉瘤细胞生物学行为的影响及其潜在机制。具体研究内容如下：

首先，构建针对FASN基因的miRNA干扰载体，并将其转染至骨肉瘤细胞中，通过实时定量PCR和蛋白质免疫印迹等技术，检测干扰效果，确保成功干扰FASN基因的表达。

其次，运用细胞增殖实验（如MTT法、EdU法）检测miRNA干扰FASN表达后对骨肉瘤细胞增殖能力的影响；通过流式细胞术分析细胞周期分布和凋亡情况，明确其对细胞周期和凋亡的调控作用；采用细胞划痕实验和Transwell实验评估细胞的迁移和侵袭能力变化。

最后，通过蛋白质免疫印迹、实时定量PCR等技术，研究miRNA干扰FASN表达后，骨肉瘤细胞内相关信号通路（如PI3K/AKT、MAPK等通路）关键分子的表达变化，深入探讨其作用机制，为骨肉瘤的治疗提供新的靶点和理论依据。

1.4研究方法与技术路线

本研究将使用人骨肉瘤细胞系（如MG63、U2OS等）作为实验细胞，从美国典型培养物保藏中心（ATCC）购买。购置DMEM培养基、胎