重组蛋白药物培养制备技术全解析.pptxVIP

重组蛋白药物培养制备技术全解析

汇报人：文小库

2025-06-14

目录

CONTENTS

01

细胞培养系统构建

02

培养基优化策略

03

蛋白表达调控方法

04

下游纯化工艺开发

05

质量分析体系建立

06

规模化生产技术应用

01

细胞培养系统构建

细胞生长特性

选择生长迅速、易于培养、适应性强、稳定性高的细胞系。

01

表达产物产量

确保细胞能够高效表达目标重组蛋白。

02

安全性

确保细胞系无致病性、无内毒素、不产生有害代谢产物。

03

细胞遗传学特性

选择遗传背景清晰、基因型稳定的细胞系。

04

宿主细胞选择标准

基因转染技术方案

载体选择

转染方法

转染效率评估

稳定性验证

根据目标蛋白特性选择合适的表达载体，如质粒、病毒载体等。

包括化学转染、物理转染、生物转染等多种方法，需根据细胞类型和载体特性选择。

通过检测目标蛋白表达量、细胞生长状况等指标评估转染效果。

确保转染后的细胞能够稳定传代并持续表达目标蛋白。

生物反应器参数控制

温度控制

根据细胞生长和目标蛋白表达需求，设定适宜的培养温度。

02

04

03

01

溶氧浓度

确保细胞生长所需氧气充足，同时避免氧浓度过高对细胞造成损害。

pH值调节

通过添加酸碱溶液或采用缓冲系统，维持培养液的pH值稳定。

营养物质与代谢物监控

定期检测培养液中营养成分的消耗和有害代谢产物的积累，及时补料和换液。

02

培养基优化策略

基础配方设计原则

原料选择

选用高质量、来源可靠的原料，确保营养成分的稳定性和可靠性。

配方优化

营养成分的协同作用

根据重组蛋白药物的特性和生产工艺，调整营养成分的种类和比例，以满足细胞生长和产物合成的需求。

注重各种营养成分之间的协同作用，提高培养基的整体性能。

1

2

3

营养补充剂适配性

适配性研究

对不同的营养补充剂进行适配性研究，筛选出最适合重组蛋白药物生产的组合。

03

添加适量的微量元素和无机盐，以满足细胞生长和产物合成的特殊需求。

02

微量元素和无机盐的添加

氨基酸和维生素的添加

根据细胞生长和产物合成的需要，适量添加氨基酸和维生素等营养补充剂。

01

代谢副产物动态监测

实时监测代谢副产物的种类和数量，及时发现并处理异常代谢情况。

代谢副产物的种类和数量

通过调节培养基的成分和工艺参数，调控代谢途径，减少有害代谢副产物的产生。

代谢途径的调控

将有害代谢副产物转化为有用的物质，提高资源的利用率和生产效率。

代谢副产物的利用

03

蛋白表达调控方法

诱导条件优化路径

诱导剂选择

诱导温度优化

诱导时间控制

诱导剂浓度调整

选择高效、低毒的诱导剂，提高蛋白表达效率和产量。

寻找最适温度，以平衡蛋白表达速率和细胞生长速率。

确定最佳诱导时间，避免蛋白过表达和细胞压力。

精细调节诱导剂浓度，以达到最佳蛋白表达效果。

翻译后修饰质量控制

磷酸化修饰

通过调节磷酸化水平，影响蛋白活性和稳定性。

01

糖基化修饰

控制糖基化程度和类型，确保蛋白生物功能和药效。

02

乙酰化修饰

研究乙酰化对蛋白功能的影响，优化蛋白修饰状态。

03

泛素化修饰

调节泛素化水平，控制蛋白降解速率和细胞定位。

04

表达量稳定性验证

6px

6px

6px

在细胞水平检测蛋白表达量的稳定性，确保一致性。

细胞水平验证

在长时间储存条件下，观察蛋白表达量的变化情况。

长期稳定性考察

对纯化后的蛋白进行定量检测，确认其表达量稳定。

纯化后验证

01

03

02

模拟实际应用场景，评估蛋白在极端条件下的稳定性。

加速稳定性测试

04

04

下游纯化工艺开发

亲和层析介质

根据目标蛋白与特定配体结合的原理进行选择，如蛋白A亲和层析、离子交换层析等。

疏水性层析介质

根据目标蛋白的疏水性进行选择，适用于分离纯化膜蛋白等。

离子交换层析介质

根据目标蛋白的电荷性质进行选择，包括强阴离子交换和强阳离子交换。

凝胶过滤层析介质

根据目标蛋白的分子大小和形状进行选择，如凝胶排阻层析等。

层析介质选择标准

杂质去除关键技术

沉淀与离心

层析技术

过滤与超滤

电泳技术

通过改变溶液条件，使杂质沉淀并通过离心去除。

利用层析介质与目标蛋白的特异性结合，将杂质与目标蛋白分离。

通过过滤或超滤技术，去除溶液中的微粒和细菌等杂质。

利用杂质与目标蛋白在电场中的迁移速率差异进行分离。

目标蛋白回收率控制

优化层析条件

通过调整层析介质的种类、pH值、离子强度等条件，提高目标蛋白的回收率。

浓缩与稀释

在层析过程中，通过浓缩和稀释的方法，调整目标蛋白的浓度，提高回收率。

稳定性处理

加入适当的稳定剂或保护剂，防止目标蛋白在层析过程中失活或降解。

精细层析

采用更精细的层析技术，如亲和层析、离子交换层析等，提高目标蛋白的纯度和回收率。

05

质量分析体系建立

纯度检测方法设计

紫外分光光度法