RNAi抑制TLR9对小鼠骨髓树突状细胞生物学特性的影响探究.docxVIP

RNAi抑制TLR9对小鼠骨髓树突状细胞生物学特性的影响探究

一、引言

1.1研究背景与意义

树突状细胞（DendriticCell，DC）是人体内功能最强的专职性抗原提呈细胞（APC），因其细胞膜上伸出许多类似于神经细胞的树突状突起而得名。DC虽在体内数量稀少，仅占人外周血单个核细胞的1%，却有着强大的抗原摄取、加工处理和递呈能力。未成熟的DC细胞迁移能力较强，能够快速迁移至感染或炎症部位，摄取并处理抗原；而成熟的DC细胞则可有效激活初始型T细胞，启动、调控并维持免疫应答，在适应性免疫应答的诱导和启动、维持免疫耐受、调节自身免疫反应等过程中扮演着关键角色，是免疫系统中不可或缺的重要组成部分，对维持机体免疫平衡和防御外来病原体感染意义重大。

Toll样受体9（Toll-likereceptor9，TLR9）是Toll样受体家族的重要成员，属于跨膜蛋白受体。其蛋白结构包含胞外区、跨膜区和胞内区，胞外区富含亮氨酸重复序列（LRRs），主要负责识别特定的病原体相关分子模式（PAMPs）或损伤相关分子模式（DAMPs），而胞内区含有的Toll/白细胞介素-1受体（TIR）结构域，则是信号转导的关键区域，能与下游信号分子相互作用，启动免疫信号通路。TLR9主要表达于巨噬细胞、树突状细胞、B细胞等免疫细胞，在非免疫细胞如上皮细胞、内皮细胞等中也有一定程度表达。其主要配体为未甲基化的CpGDNA，这种特定DNA结构在细菌、病毒等病原体中广泛存在，但在哺乳动物细胞中含量较低。当病原体入侵机体，TLR9识别病原体释放的CpGDNA后，胞内TIR结构域会招募髓样分化因子88（MyD88），形成TLR9-MyD88复合物，进一步激活下游信号分子，经过一系列信号转导，最终激活核因子-κB（NF-κB）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）等转录因子，促使相关基因表达，诱导产生多种细胞因子、趋化因子和共刺激分子，启动固有免疫应答，并为适应性免疫应答的激活创造条件。

RNAi（RNAinterference）即RNA干涉，是生物体内普遍存在的由双链RNA（dsRNA）参与指导，在特定酶的参与下以外源和内源mRNA为降解目标的转基因沉默现象。人们可通过向有机体引入小片段干涉RNA分子（siRNAs）和发夹样RNA分子（shRNAs），特异性地降解目标mRNA，进而探索基因功能，较传统基因敲除更为有效、方便。随着基因载体稳定性的不断改进和提高，构建干涉载体已日趋成熟，RNAi成为决定基因功能的优先选择手段，在医学领域，有着广泛的应用前景，可用于抑制异常基因表达，为癌症及遗传病等人类顽症的治疗带来希望。

在免疫系统中，DC与TLR9关系密切。TLR9在DC中表达，DC可通过TLR9识别病原体相关分子模式，激活免疫应答。深入研究二者关系，对理解免疫调节机制至关重要。通过RNAi技术抑制TLR9，为研究DC功能提供了新途径，有助于揭示DC在免疫应答中的调控机制。并且，该研究在疾病治疗方面意义重大。许多疾病与免疫失衡相关，如自身免疫性疾病中，免疫系统攻击自身组织；肿瘤疾病中，肿瘤细胞逃避免疫监视。调控DC功能和免疫应答或可成为治疗这些疾病的新策略。抑制TLR9后研究DC生物学特性变化，能为相关疾病治疗提供理论依据和潜在靶点，推动免疫治疗发展，为患者带来新希望。

1.2国内外研究现状

在树突状细胞（DC）的研究方面，国外起步较早，美国科学家Steinman和Cohn早在1973年便在小鼠脾脏中发现了DC。此后，对于DC的研究不断深入，目前已经明确DC起源于骨髓造血祖细胞或单核细胞分化而成，其亚群包括传统树突状细胞（cDCs）、浆细胞样树突状细胞（pDCs）和单核细胞衍生的树突状细胞（moDCs）。cDCs又根据功能不同分为cDC1s和cDC2s，cDC1s能特异性地激活CD8+T细胞应答，cDC2s则优先激活CD4+T细胞应答，而pDCs特异性表达TLR7和TLR9识别不同的抗原。在国内，对DC的研究也在逐步跟进，围绕DC在免疫调节中的作用、DC肿瘤疫苗的研发等方面展开了诸多研究，例如利用DC强大的呈递功能，激活患者体内的T细胞免疫应答，从而发挥治疗肿瘤的作用。

针对Toll样受体9（TLR9）的研究，国外对其结构、分布、识别配体以及信号传导通路进行了深入探究，明确了TLR9主要表达于免疫细胞，可识别未甲基化的CpGDNA并启动免疫反应，且在感染性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤等疾病的发生发展中扮演重要角色。国内也在积极开展相关