1.2基因工程的基本操作程序优质说课稿.pptxVIP

;;;;目的基因的获得办法;1）从基因文库中获取目的基因：;;;用DNA探针从基因文库中精确提取

目的基因

把DNA分子双链解开，根据所需的基因核苷酸序列制成一段与之互补的核苷酸短链，并用同位素标记，即成探针。用这一探针查基因文库中已经解旋的DNA片段，如果有一片段与探针片段发生互，这一片段就含有所需的的基因。;用DNA重组技术将某种生物的总DNA用特定的限制性内切酶切割成一种个片段，然后将这些片段随机地连接在某些质粒或其它载体上，再将它们转移到适宜的宿主细胞中，通过细胞的增殖而构成各个片段的无性繁殖系（克隆），当这些克隆多到能够涉及某种生物的全部基因时，这一批克隆的总体就称为该种生物的基因文库。这一定义也合用于线粒体DNA和叶绿体DNA，分别称为某种生物的线粒体基因文库或叶绿体基因文库。为了有效地保存基因文库，可通过细菌在固体培养基上繁殖而使包含各个特定DNA片段的细菌增多。通过分子杂交的办法，能够筛选出包含有所需基因的DNA片段的细菌（或噬菌体）。通过扩增得到大量这样的细菌（或噬菌体），从中便可分离出所需基因的DNA片段。建立和使用基因文库是分离高等真核生物基因的有效手段，对于基因定位和基因工程的研究都很有用。;2）人工合成;哪些新技术能大大简化基因工程的操作技术？;;PCR——聚合酶链式反映

扩增过程：加热DNA变性解旋

引物与单链互补结合

在DNA聚合酶作用下进行延伸

（指数形式扩增。）;;基因体现载体的构建

目的基因

启动子位置：基因的首端

功效：RNA聚合酶识别和结合的

构成部位，驱动基因转录mRNA

终止子位置：基因的尾端

功效：终止转录

标记基因：鉴别受体细胞与否有目的基因;;环节二：基因体现载体的构建;;①直接导入法有电击、显微注射、直接吸取、基因枪等办法。

（1）电击法：借助电击仪高压脉冲把目的基因打入宿主细胞。

（2）显微注射法：运用微量注射器在显微镜下直接把目的基因注入宿主细胞。

（3）直接吸取法：把目的基因和宿主细胞混在一起，让其吸取。

（4）基因枪法：在金属微粒上涂一层目的基因，然后发射到宿主细胞中。

②间接导入法惯用的载体是质粒、λ噬菌体、科斯质粒。

（1）质粒是细菌染色体DNA以外的环状双链DNA分子，它能自我复制，也可整合到细胞染色体DNA中与其一起体现。质粒普通还含有标记基因，这能够从细胞的表型特性来识别。

（2）λ噬菌体是一种细菌病毒，其环状双链DNA能够作为目的基因的载体。

（3）科斯质粒是一种杂种质粒，含有质粒和λ噬菌体的部分次序，很适合用作真核生物基因的载体。;1.将目的基因导入植物细胞;2.将目的基因导入动物细胞;3.将目的基因导入微生物细胞;;环节四：目的基因的检测与鉴定;四、目的基因的检测与鉴定;思考：检测mRNA与否合成，能够用分子杂交的办法吗？;不能，受体细胞必须体现出特定的性状，才干阐明目的基因完毕了体现。;;前三步的解决十分繁锁，为确保目的基因得到有效运用，普通用大量的受体细胞来接受不多的目的基因。这样，解决的受体细胞中真正摄入了目的基因的极少，必须将它从中检测出来。;多细胞生物的检测，将每个受体细胞单独培养并诱导发育成完整个体，检测这些个体与否摄入目的基因，摄入的基因与否体现（与否体现出对应的性状）。裁减无变化的个体，保存有对应变化的个体进一步培养、研究。;寻根问底——

（1）为什么要构建基因文库？直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗？;寻根问底：将目的基因直接导入受体细胞不是更简便吗？如果这样做，成果会如何？;1.运用大肠杆菌能够生产出人的胰岛素，联系前面有关细胞器功效的知识，结合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生产人的糖蛋白，能够用大肠杆菌吗？;（1）从小鼠中克隆出β-珠蛋白基因的编码序列（cDNA）。

（2）将cDNA前接上在大肠杆菌中能够合用的启动子，另外加上抗四环素的基因，构建成一种体现载体。

（3）将体现载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌。如果体现载体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉；如果培养基上长出大肠杆菌菌落，则表明β-珠蛋白基因已进入其中。

（4）培养进入了β-珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌体，破碎后从中提取β-珠蛋白。;思考：作为基因工程体现载体，只需含有目的基因就能够完