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基于Mu转座子的玉米突变体筛选及穗行数基因克隆研究

一、引言

1.1研究背景与意义

玉米（ZeamaysL.）作为全球最重要的粮食作物之一，在农业生产中占据着举足轻重的地位。其不仅是人类重要的食物来源，为全球众多人口提供能量与营养，也是优质的饲料原料，在畜禽养殖行业发挥着关键作用，为肉类、蛋类和奶制品的生产提供坚实支撑。据统计，近年来我国玉米种植面积和产量在谷物中的占比均维持在40%以上，且总体呈现波动增加态势，2023年我国玉米种植面积在谷物中的占比达44.25%，产量在谷物中的占比为45.03%。同时，玉米在工业领域应用广泛，是生产生物燃料、食品添加剂、化工产品等的重要原料，对缓解能源压力、促进相关产业发展意义重大。

在玉米遗传研究和育种工作中，挖掘基因资源、解析基因功能是实现品种改良和产量提升的核心。Mu转座子作为一种高效的分子工具，具有独特的转座特性。1978年被发现的Mu转座子家族，是植物中已知转座活性及诱变能力最强的转座元件。当它跳跃到某个基因后，能使基因功能丧失，进而产生大量突变表型，形成明显改变的性状。构建玉米Mu转座子插入突变体库，能够为基因功能研究提供丰富的材料，极大地推动玉米功能基因组学的发展，有助于全面解析玉米复杂的遗传机制，为玉米遗传改良奠定坚实的理论基础。

穗行数作为玉米果穗产量形成的基础结构，是影响玉米产量的关键因素之一。适度增加穗行数可有效提高玉米果穗的籽粒数目，从而显著提升玉米产量。然而，截至目前，通过正向遗传学克隆的玉米穗行数基因数量稀少，穗行数形成的遗传调控机制仍未完全明晰。开展穗行数相关基因片段的克隆研究，有助于深入揭示穗行数的遗传调控网络，挖掘关键基因资源，为玉米高产育种提供有力的基因储备和技术支持，对培育高产优质玉米新品种，保障全球粮食安全具有重要的现实意义。

1.2国内外研究现状

国外在利用玉米Mu转座子构建突变体库方面开展了大量研究，较早以Mu转座子供体材料与其他玉米自交系杂交，构建插入诱变群体并形成突变体库，其中美国构建的UniformMu插入数据库在国际上具有重要影响力。国内近年来也取得显著进展，2019年江苏省农业科学院种质资源所赵涵研究员团队、中国农业大学宋任涛教授团队和上海大学合作创建了目前世界上最大的玉米转座子插入资源库（ChinaMu）。该资源库利用Mu活性系与B73自交系杂交，结合转座子标签分离技术和第二代高通量测序技术，对20000多株样本进行处理，筛选出2581株遗传性状显著的玉米纳入基因突变体库。通过一系列技术分析，获得约97000个可遗传插入位点，是UniformMu的2倍，其中66565个位点为高质量可遗传插入，插入覆盖了玉米20244个（45.7%）基因。这一成果为全球玉米基因组研究提供了重要遗传资源，也提升了我国在玉米转座子研究领域的国际地位。

在穗行数相关基因研究方面，国内外学者通过多种方法进行探索。如利用全基因组关联分析策略，以203份主要玉米自交系为材料，采用分布于玉米基因组的41101个单核苷酸多态性（SNP）标记对穗行数进行关联分析，鉴定出9个与穗行数显著关联（P0.0001）的SNP，分别位于染色体框1.02、1.10、7.03、8.02、9.06和10.03。其中8个SNP位于已定位的数量性状座位（QTL）区间内，并在显著SNP位点LD区域内发掘出4个候选基因。中国农业大学赵海铭副教授联合崖州湾国家实验室张祖新教授挖掘出穗行数基因KRN5b。KRN5b编码磷脂酰肌醇磷酸酶，通过调节玉米幼穗内部维管形成层的生长素运输蛋白分布，影响小穗原基处生长素含量，进而决定玉米穗行数。然而，当前穗行数相关基因研究仍存在不足，已克隆的基因数量有限，基因间的互作关系及复杂调控网络尚未完全解析，且研究多集中在少数玉米自交系，缺乏对不同种质资源的全面研究。

1.3研究目标与内容

本研究旨在通过系统的实验方法，筛选出具有特定表型的玉米Mu转座子插入突变体，并克隆与穗行数相关的基因片段，为深入解析玉米穗行数的遗传调控机制奠定基础，同时为玉米遗传育种提供重要的基因资源和理论依据。具体研究内容如下：

玉米Mu转座子插入突变体的筛选：收集不同来源的玉米材料，利用Mu转座子构建突变体库。通过对大量突变体植株进行田间表型观察，包括株高、叶形、穗部形态等，结合实验室分子检测技术，筛选出具有明显突变表型且稳定遗传的Mu转座子插入突变体。

穗行数相关基因片段的克隆：以筛选出的突变体和正常玉米材料为对照，运用分子生物学技术，如PCR扩增、基因测序等，对可能与穗行数相关的基因区域进行扩增和测序。通过生物信息学分析，与