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阳离子脂质体介导NGB基因转染对庆大霉素致豚鼠耳毒性保护作用的实验探究

一、引言

1.1研究背景与意义

听力对于人类的沟通、社交和认知发展至关重要，然而，耳聋疾病正日益成为全球范围内的重大健康问题。世界卫生组织发布的《世界听力报告》显示，全球有五分之一的人听力受损，影响超15亿人。在我国，近年来突发性耳聋发病率呈现出上升且年轻化的趋势，不仅给患者的生活、工作和学习带来极大困扰，也给家庭和社会造成沉重负担。

庆大霉素作为一种广谱抗生素，在临床上曾被广泛应用于治疗多种感染性疾病。但它具有明显的耳毒性，可能导致听力减退、耳鸣，甚至永久性耳聋。这一副作用与内耳对氨基糖苷类抗生素有特异的亲和力有关，药物在内耳淋巴液蓄积形成高浓度，进而引起感觉毛细胞和血管变性。曾经我国滥用抗生素的情况较为普遍，儿童使用庆大霉素导致耳聋的案例屡见不鲜，如著名的春节联欢晚会节目《千手观音》中的很多舞蹈表演者便是因儿时使用庆大霉素致聋。尽管如今在使用庆大霉素时会更加谨慎，但在一些医疗资源相对匮乏的地区或特定情况下，其耳毒性风险仍然不容忽视。

脑红蛋白（Neuroglobin，NGB）是新近发现的体内第三类重要的携氧蛋白，主要在脑组织中表达，在神经系统氧的摄取、运输和利用等生理过程中起着极其重要的作用。研究推测，Ngb的功能可能是促进氧向神经元中的线粒体扩散，或直接介导氧向线粒体的传递，有助于ATP的产生，从而对正常神经细胞功能的维持起重要作用。鉴于NGB在神经系统中的关键作用，对其在保护神经元免受损伤方面的研究具有重要意义，尤其是在药物性耳聋的防治领域。

本研究旨在探讨NGB基因转染对庆大霉素致豚鼠耳聋的保护作用，通过动物实验深入了解NGB基因在减轻庆大霉素耳毒性损伤中的机制，为临床防治药物性耳聋提供新的理论依据和潜在治疗策略，有望为广大受药物性耳聋威胁的患者带来新的希望，具有重要的现实意义和应用价值。

1.2研究目的与问题提出

本研究的主要目的是验证NGB基因转染对庆大霉素致豚鼠耳毒性是否具有保护作用。通过构建相关实验模型，观察NGB基因转染后豚鼠在听力、耳蜗形态结构以及相关蛋白表达等方面的变化，明确NGB基因在抵御庆大霉素耳毒性过程中的具体作用。

基于此目的，本研究拟解决以下关键问题：

NGB基因转染能否有效降低庆大霉素导致的豚鼠听力阈值升高？通过听性脑干反应（ABR）等测听技术，对比NGB基因转染组与未转染组豚鼠在使用庆大霉素前后的听力变化，判断NGB基因转染对听力的保护效果。

NGB基因转染对庆大霉素损伤的豚鼠耳蜗毛细胞和血管纹等结构有何影响？利用耳蜗基底膜铺片、扫描电镜等技术手段，观察不同组豚鼠耳蜗组织的形态学变化，分析NGB基因转染是否能够减轻庆大霉素对耳蜗结构的损害。

NGB基因在豚鼠耳蜗内的表达情况如何？以及其表达与豚鼠听力保护和耳蜗结构保护之间存在怎样的关联？通过免疫组织化学染色等方法检测NGB蛋白在豚鼠耳蜗内的表达量和分布，探究NGB基因表达与耳毒性保护作用之间的内在联系。

1.3国内外研究现状

在庆大霉素耳毒性机制研究方面，国内外学者已进行了大量深入的探索。研究表明，庆大霉素进入内耳后，会与内耳毛细胞和血管纹细胞等结构中的特定分子结合，干扰细胞的正常代谢过程。例如，庆大霉素可能会破坏细胞内的抗氧化防御系统，导致活性氧（ROS）大量积累，引发氧化应激损伤，进而导致毛细胞凋亡和血管纹功能障碍，最终引起听力下降。同时，有研究发现庆大霉素还可能影响内耳细胞的离子平衡，干扰听觉信号的传导，进一步加重耳毒性损伤。

关于NGB基因的研究，近年来也取得了一系列重要进展。NGB被发现广泛存在于脊椎动物中枢神经系统内，其结构具有高度保守性。研究人员通过创建敲除小鼠或Ngb过表达的动物/细胞模型来识别其在细胞内的特性，发现NGB能够通过将活性氧转化为危害较小的物种来防止氧化应激，从而维持氧化还原平衡，并通过保护三磷酸腺苷产生来维持线粒体稳态。在新生缺氧缺血性脑损伤大鼠模型中，通过鼻腔内移植Cytoglobin基因改造的人类脐带间充质干细胞，发现该蛋白具有神经保护抗凋亡特性，这也从侧面反映了NGB类似蛋白在神经系统保护中的重要作用。

然而，当前研究仍存在一些不足之处。在庆大霉素耳毒性防治方面，虽然已经明确了其耳毒性机制，但现有的治疗方法仍存在局限性，效果不尽人意。而在NGB基因与药物性耳聋的关联研究中，目前的研究大多集中在细胞层面或其他神经系统疾病模型，针对NGB基因转染对庆大霉素致豚鼠耳聋保护作用的系统性动物实验研究相对较少，其具体的保护机制尚未完全明确。

本研究将以此为切入点，通过严谨的动物实验设计，深入探讨NGB基因转染对庆大霉素致豚鼠耳毒性的保