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细胞培养常规检查

演讲人：

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目录

02

培养基质控要点

01

实验前准备规范

03

污染监测体系

04

细胞状态评估

05

传代处理规范

06

数据记录与追溯

01

实验前准备规范

设备灭菌验证标准

采用湿热灭菌法，确保设备内部和表面达到完全无菌状态。

灭菌方法

根据不同设备材质和性能，设定适宜的温度和时间进行灭菌。

灭菌温度和时间

使用生物指示剂或化学指示剂验证灭菌效果，确保灭菌效果符合规定标准。

灭菌效果验证

试剂质量检测流程

试剂储存条件

根据试剂的特性和稳定性，合理储存试剂，避免受潮、受热或污染等影响。

03

通过化学反应或生物学方法验证试剂的纯度和活性，确保试剂符合实验要求。

02

试剂质量验证

试剂外观检查

检查试剂瓶身是否有破损、标签是否清晰、试剂是否过期等。

01

操作环境洁净度控制

操作室空气洁净度

通过空气净化系统控制操作室内的空气洁净度，避免微生物污染。

01

操作台面洁净度

定期清洁操作台面，使用消毒剂擦拭台面和设备表面，确保操作台面洁净无菌。

02

实验人员操作规范

实验人员需遵守实验室规章制度，穿戴洁净的实验服、手套和口罩，避免操作过程中的污染。

03

02

培养基质控要点

pH值校准方法

使用精确的pH计进行校准，确保准确性和稳定性。

校准设备

校准标准

校准频率

根据不同的细胞类型和用途，调整pH值至适宜范围，通常维持在7.2-7.4之间。

每次制备培养基前均需进行pH值校准，确保培养环境的一致性。

使用专用渗透压计进行测量，确保数值准确。

渗透压计

每次制备培养基前以及细胞培养过程中均需进行渗透压监测，避免细胞受损。

监测频率

根据细胞类型和培养要求，通过添加无机盐或其他物质调节渗透压至适宜范围。

渗透压调节

渗透压监测标准

营养成分有效性检测

污染检测

进行细菌、真菌等微生物污染检测，确保培养基的无菌状态。

03

检测培养基中的维生素、氨基酸、生长因子等有效成分的含量，以保证培养效果。

02

有效成分检测

营养成分分析

对培养基中的营养成分进行定量分析，确保各种成分含量符合培养要求。

01

03

污染监测体系

细菌污染快速检测

细菌培养法

通过接种、培养、观察等步骤，检测样品中是否存在细菌污染。

01

快速检测方法

利用生物学、免疫学或分子生物学技术手段，快速筛查样品中细菌污染情况。

02

自动化检测仪器

应用自动化仪器对样品进行细菌污染检测，提高检测效率和准确性。

03

真菌污染显微观察

利用光学显微镜或电子显微镜观察样品中是否存在真菌污染。

显微镜观察

真菌鉴定

污染程度评估

通过形态学特征和生理生化特性对检测到的真菌进行鉴定。

根据显微观察结果，评估样品中真菌污染的程度和范围。

支原体专用筛查技术

利用支原体生长特性，对样品进行分离培养，观察是否有支原体生长。

支原体培养法

采用PCR、荧光原位杂交等分子生物学技术，快速检测样品中支原体DNA或RNA。

分子生物学技术

利用专门试剂盒对样品进行支原体鉴定，操作简便、快速、准确。

支原体鉴定试剂盒

04

细胞状态评估

观察细胞形态是否正常，包括细胞大小、形状、核形态等，以及细胞是否出现异常形态，如变形、萎缩或肿胀等。

形态学显微镜检

细胞形态

观察细胞结构是否完整，包括细胞膜、细胞质和细胞核等，以及细胞器是否清晰可见。

细胞结构

观察细胞增殖情况，包括细胞分裂、增殖速度等，以及细胞是否出现增殖异常，如过度增殖或增殖受阻等。

细胞增殖

活率测定台盼蓝法

原理

注意事项

操作步骤

台盼蓝是一种活细胞不能吸收的染料，因此可以通过染色来区分活细胞和死细胞。

将细胞悬液与台盼蓝染料混合后，在显微镜下观察细胞染色情况，根据染色细胞的比例来计算细胞活率。

需要严格控制染料浓度和染色时间，以避免对细胞造成损伤或误判。

代谢活性MTT检测

MTT是一种能被活细胞还原成紫色甲臢的染料，通过测定紫色甲臢的生成量可以反映细胞的代谢活性。

原理

操作步骤

注意事项

将MTT染料加入细胞培养液中，孵育一段时间后，用有机溶剂提取紫色甲臢，测定其吸光度值，根据吸光度值计算细胞代谢活性。

MTT检测需要在一定细胞密度下进行，且需要设置对照实验以排除非细胞因素的干扰。

05

传代处理规范

消化时间控制策略

消化时间不宜过长

过长的消化时间会导致细胞损伤和死亡，影响细胞活性和增殖能力。

消化时间不宜过短

消化时间需根据细胞类型调整

过短的消化时间会导致细胞无法充分分散，形成细胞团块，影响传代效果。

不同类型的细胞对消化时间的要求不同，需根据细胞特性进行调整。

1

2

3

接种密度计算标准

不同类型的细胞具有不同的生长特性和增殖速率，接种密度需根据细胞特性进行计算。

接种密度需根据细胞生长特性确定

过高的接种密度会导致细胞过度拥挤，影响细胞生长和分裂；过低的接种密度则会