细胞生物学实验.pptVIP

细胞生物学实验海洋科学系刘均玲

实验一细胞膜的渗透性一、实验目的与要求1.掌握细胞膜通透性的实验方法。2.观察并掌握相对分子量、脂溶性大小、电解质和非电解质对细胞膜通透性的影响。

细胞膜在不断变化的环境中必须保持自身的稳定状态才能生存。细胞膜允许一些物质通透，又能降低甚至阻止另一些物质的通透，所以细胞膜具有选择通透性。二、实验原理

未溶血溶血血红蛋白从红细胞中逸出的现象称为溶血现象。渗入红细胞的溶质能提高红细胞渗透压，使水进入红细胞，引起溶血及细胞膜破裂。此时光线较容易通过溶液，使溶液呈现透明即溶血。二、实验原理

二、实验原理在不同相对分子量、脂溶性大小以及电解质和非电解质等各种溶液中，红细胞质膜对各种溶质的渗透性不同。由于溶质透入速度不同，溶血时间也不同。因此，通过观察红细胞溶血现象时间的不同来记录渗入速度，从而测量各种物质通透性的差别。

四、实验方法与步骤溶血现象的观察：取试管2支，分别加入0.017mol/L氯化钠和0.032mol/L葡萄糖低渗溶液3ml，再加入2滴制备好的50%鸡红细胞悬液，注意观察溶液颜色的变化，由不透明的红色悬液变成透明的血红蛋白溶液（红细胞发生破裂，造成100%红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液）。

四、实验方法与步骤红细胞的渗透性（1）取试管一支，加入0·17mol/L氯化钠溶液3ml，再加入2滴制备好的50%鸡红细胞悬液，轻轻摇动，混匀后静置于温室中，观察试管中发生溶血的时间及其变化。注意是否有颜色变化？是否有溶血现象？为什么？

四、实验方法与步骤（2）分别在下列几种等渗溶液中进行实验，步骤同（1）。0.32mol/L葡萄糖0.17mol/L氯化铵0.17mol/L醋酸铵0.17mol/L硝酸钠0.12mol/L草酸铵0.12mol/L硫酸钠0.32mol/L甘油0.32mol/L乙醇0.32mol/L丙酮

五、注意事项试管中有红细胞和测试溶液时，不应强力摇晃，以免造成人为的红细胞破裂。目测法判断标准：快速溶血：＋＋＋；慢速溶血：＋＋或＋；不溶血：－。溶血现象可用一张有字的白纸来辅助识别，能够清楚地透过溶液看到溶液后方纸上清晰的字迹时，为完全溶血。因相对分子质量大小对膜通透性有影响，所以将溶血时间适当地延长至15min，15min时仍然不溶即判断为不溶血。

编号溶液种类是否溶血溶血所需时间结果分析12345678910六、作业记录观察到的现象，并对实验结果进行分析和比较。

实验二鸡血细胞的体外融合试验

一、实验目的与要求掌握PEG体外诱导细胞融合的原理和基本方法。掌握在光学显微镜下融合细胞的形态特征。

细胞融合是用人工的方法使两个或以上的细胞融合成异核细胞。异核细胞可进入有丝分裂，使来自两个亲本细胞的基因组合在一起，形成只含一个细胞核的杂种细胞。二、实验原理

PEG溶液作为助融剂可改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组，引起细胞融合。二、实验原理

细胞融合的频率和活力与所用PEG的分子质量、浓度、作用时间以及细胞的生理状态及密度等有关。本方法用分子质量为400～6000的PEG溶液可引起细胞的聚集和粘连，产生高频率的细胞融合。二、实验原理

三、实验材料、仪器和试剂1.材料：成年家鸡。2.主要仪器：注射器、刻度离心管、离心机、血细胞计数板、水浴锅、滴管、显微镜、烧杯、容量瓶、凹面载玻片、盖玻片、酒精灯等。3.主要试剂：0.85%NaCl溶液、GKN液、50%（W/V）PEG400溶液、Hanks液、0.5%酚红、Janusgreen染液等。

1.鸡血细胞悬液的制备从家鸡的翼根静脉采血制备抗凝全血。加入4倍体积的0.85%NaCl溶液，制成红细胞储备液，保存于4℃。取鸡血细胞储备液1ml，加入4ml0.85%NaCl溶液，混匀后，1200rpm离心5min，弃去上清液，再加入5ml0.85%NaCl溶液按上述条件离心一次。最后，弃去上清液，加入10ml的GKN溶液制成鸡血细胞悬液。取0.5ml鸡血细胞悬液，用GKN溶液稀释至1X107个/ml，备用。四、实验方法与步骤

2.鸡血细胞的收集吸取1ml鸡血细胞悬液放入离心管中，加入4mlHanks液混匀，1000rpm离心5min