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家蚕DRP与SSP基因的结构、功能及调控机制研究

一、引言

1.1家蚕研究背景及意义

家蚕（Bombyxmori）作为一种重要的经济昆虫，在人类历史发展进程中扮演着举足轻重的角色。其起源于中国，由栖息在桑树上的野桑蚕分化而来，距今已有5000余年的家养历史。随着丝绸之路的开辟，中国家蚕品种逐渐传至朝鲜、日本、印度、埃及、西班牙、俄罗斯等多个国家，养蚕业也随之在全球范围内发展起来。如今，养蚕业仍是中国农业经济的重要组成部分，年出口创汇额在农业相关产品中名列前茅。

家蚕全身都是宝，用途十分广泛。其蚕蛹富含蛋白质、脂肪、碳水化合物等营养成分，可作为营养品直接食用，由蚕蛹制造成的天然氨基酸还可用于生产食品及药品；雄蚕蛾可制成药酒及滋补品；蚕沙是良好的家畜、鱼类饲料和肥料；蚕丝更是因其优良的品质，被广泛用于制作各种服饰，蚕茧还可作为保鲜剂，丝蛋白可制作膜、微粒子、多孔体等各种材料。不仅如此，据《中药大辞典》记载，家蚕幼虫感染白僵菌而僵死的全虫（白僵蚕）、干燥粪便（蚕沙）、茧壳（蚕茧）、蜕皮（蚕蜕）、蚕蛹均可入药。

家蚕还是鳞翅目昆虫研究首选的典型模式物种。其属于完全变态昆虫，在一个世代中，需要依次历经卵、幼虫、蛹、成虫四个形态完全不同的发育阶段，这一特性使得家蚕成为研究昆虫生长发育、遗传变异、生理代谢等生命过程的理想模型。通过对家蚕的研究，能够深入了解昆虫的生物学特性，为农林害虫的防治提供理论基础和技术支持。例如，家蚕与许多农林害虫同属鳞翅目，研究家蚕的生理机制和遗传特性，有助于揭示这些害虫的发生规律和防治方法，从而保障农业生产的安全。

家蚕基因组研究对于蚕丝产业的发展和基础生物学研究具有重要意义。2004年，中国科学家完成了6X家蚕全基因组框架图，获得家蚕基因组大小为430Mb、18510个预测基因，并分析了基因组结构、进化及家蚕生长发育相关的基因家族等，相关成果在《Science》发表，这一成果奠定了家蚕基因组研究的基础。2008年，中日合作绘制了家蚕基因组9X精细图谱，将87%的基因组片段和94%的基因定位到染色体上，进一步推动了家蚕基因组学的发展。家蚕基因组研究不仅有助于深入了解家蚕的遗传基础和分子调控机制，为培育优良家蚕品种、提高蚕丝产量和质量提供理论依据，还能为揭示基础生物学现象提供重要参考，推动整个生命科学领域的发展。例如，通过对家蚕基因的研究，可以发现与蚕丝合成相关的关键基因，进而通过基因编辑等技术手段，培育出具有更高蚕丝产量和更好品质的家蚕品种，提升蚕丝产业的经济效益；同时，家蚕基因组研究也能为研究生物进化、发育生物学等基础生物学领域提供新的视角和思路。

1.2DRP和SSP基因研究现状

死亡相关蛋白基因（death-relatedprotein，DRP）在细胞程序性死亡过程中发挥着关键作用。细胞程序性死亡是生物体生长发育过程中一种重要的生理现象，对于维持生物体的正常生理功能和内环境稳定具有重要意义。目前，关于家蚕DRP基因的研究已经取得了一定的成果。已有研究利用电子克隆方法得到了家蚕DRP基因的全长cDNA序列，该基因全长为761bp，开放阅读框（ORF）长为306bp，含有2个外显子和3个内含子，编码102个氨基酸，相对分子质量约为21kD，位于家蚕的20号染色体上，且编码的蛋白与其他物种的相应蛋白具有较高的同源性。通过RT-PCR技术发现该基因在各组织和各发育阶段中均有表达，表明DRP基因在家蚕的生长发育过程中可能具有广泛的功能。此外，将DRP基因克隆到大肠杆菌表达载体pET30a中，构建了pET30a/DRP重组载体，经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导后，通过SDS检测，在约21kDa处出现一条特异的蛋白条带，成功实现了DRP基因在大肠杆菌中的表达。然而，目前对于家蚕DRP基因的功能研究还不够深入，其在细胞程序性死亡过程中的具体作用机制以及与其他基因的相互作用关系仍有待进一步探索。

家蚕唾液蛋白基因（salivarysecretedprotein，SSP）的研究也有了一定的进展。利用生物信息学方法已得到家蚕SSP基因的序列，并找到了其全长cDNA序列。通过设计引物扩增该基因，克隆测序结果与预期一致，序列已提交NCBI库。利用pET-30a表达系统，在大肠杆菌中成功表达了该基因，并利用Westernblot技术证明了表达的正确性。RT-PCR结果显示该基因在各组织和各发育阶段中都有表达。有研究利用抗核型多角体病毒家蚕近等基因系BC8、敏感性品系306，对添食病毒后各时间段的中肠进行荧光定量PCR检测，发现抗性品系BC8中，