酿酒酵母生物合成β-胡萝卜素的代谢工程策略与优化研究.docxVIP

酿酒酵母生物合成β-胡萝卜素的代谢工程策略与优化研究

一、引言

1.1β-胡萝卜素概述

β-胡萝卜素（β-carotene），又名叶红素、胡萝卜色烯、维生素A原，是类异戊二烯化合物中类胡萝卜素的一种，分子式为C_{40}H_{56}，分子量达536.88，呈现为紫红色或红色结晶粉末状。在自然界里，它以全反式以及9-顺式、13-顺式、15-顺式这4种异构体的形式存在，且天然的β-胡萝卜素主要是全反式。其化学结构具备反向对称的特点，主链包含8个异戊二烯结构，末端带有2个β-紫罗酮环结构。这种特殊的结构赋予了β-胡萝卜素独特的性质，它不溶于水、丙二醇、甘油、酸和碱，却可溶于二硫化碳、苯、氯仿、己烷及橄榄油等植物油，在甲醇或乙醇中几乎不溶。它的稀溶液呈橙黄至黄色，随着浓度增大则呈橙色。并且，β-胡萝卜素对光、热、氧不稳定，在酸性环境中易被破坏，而在弱碱性条件下相对稳定，重金属尤其是铁离子会促使其褪色。

β-胡萝卜素具有多重重要功能。在人体中，它扮演着维生素A前体的关键角色，1分子的β-胡萝卜素能够生成2分子的维生素A。维生素A对维持正常的视觉功能不可或缺，一旦缺乏，容易引发夜盲症、干眼症等眼部疾病。而且，β-胡萝卜素凭借其分子内多个共轭双键结构，展现出强大的抗氧化能力，能够有效清除体内的自由基，降低脂质过氧化程度，进而减少细胞损伤和炎症反应，在预防心血管疾病、癌症等慢性疾病方面发挥积极作用。研究显示，经常摄入富含β-胡萝卜素食物的人群，患心血管疾病和某些癌症的风险相对较低。此外，β-胡萝卜素还能增强机体的免疫力，助力免疫系统更好地抵御病原体的侵袭。

基于上述诸多优良特性，β-胡萝卜素在众多领域得到了广泛应用。在食品工业中，它常被用作着色剂，为食品增添自然的黄色至橙红色泽，如在橘汁等果汁饮料、冰激凌、糖果、蛋黄酱、调味汁和干酪等食品中均有应用，一般用量为100-400mg/kg；同时，它也是一种营养强化剂，能够提升食品的营养价值。在医药领域，β-胡萝卜素可用于预防和治疗维生素A缺乏症，还因其抗氧化和免疫调节功能，被应用于保健品的开发，用于延缓衰老、增强免疫力等。在化妆品行业，添加β-胡萝卜素不仅能使口红、胭脂等化妆品色泽自然丰满，还能起到营养皮肤、保护皮肤的作用，采用β-胡萝卜素的护肤品已受到消费者的欢迎。饲料工业中，β-胡萝卜素作为饲料添加剂添加到动物食品中，能够提高鸡鸭等家禽的产蛋率和蛋的孵化率，加深禽蛋颜色，增强虾和蛙鱼的色质。

随着人们健康意识的不断提高以及对天然、功能性产品需求的日益增长，β-胡萝卜素的市场需求呈现出持续上升的趋势。据相关市场研究报告预测，全球类胡萝卜素市场规模有望从2022年的20亿美元增长至2027年的27亿美元，复合年增长率达5.7%，其中β-胡萝卜素作为类胡萝卜素家族中的重要成员，占据着显著的市场份额。然而，目前β-胡萝卜素的生产面临一些挑战。传统的从天然植物中提取β-胡萝卜素的方法，存在原料成本高、提取工艺复杂、产量有限等问题；化学合成法虽然能实现大规模生产，但存在反应过程不环保、伴随副产物和有害物质产生等弊端。因此，开发高效、绿色的β-胡萝卜素生产技术成为当务之急。

1.2酿酒酵母在生物合成中的优势

酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae），又称面包酵母或出芽酵母，是一种与人类关系极为广泛的单细胞真核微生物。其细胞通常呈球形或卵形，直径在5-10μm之间，主要通过出芽生殖的方式进行繁殖。酿酒酵母作为微生物细胞工厂，在β-胡萝卜素的生物合成中展现出诸多显著优势。

从遗传背景角度来看，酿酒酵母是第一个完成基因组测序的真核生物，早在1996年其测序工作就已完成。其总共6607个可读框中，已有4752个得到证实，涵盖许多与细胞基本生命活动紧密相关的重要基因，这使得科研人员对其基因功能和调控机制有较为深入的了解。这种清晰的遗传背景为基因操作提供了坚实的基础，研究人员能够精准地对其进行基因编辑和改造，通过敲除或过表达特定基因，实现对代谢途径的有效调控，使其朝着有利于β-胡萝卜素合成的方向发展。例如，通过敲除竞争性途径的相关基因，可减少代谢流的分流，降低代谢负担，将更多的代谢资源导向β-胡萝卜素的合成；而过表达与β-胡萝卜素合成相关的基因，则能够提高合成途径中关键酶的表达量和活性，从而提高β-胡萝卜素的合成效率。

在基因操作方面，酿酒酵母拥有丰富且成熟的基因操作工具和技术。多种表达载体可供选择，能够满足不同基因表达水平和调控方式的需求；转化方法高效且稳定，如电转化、化学转化等技术，可将外源基因高效导入酿酒酵母