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动物细胞培养技术讲解演讲人：日期:

目录CONTENTS01技术基础概念02培养体系构建03操作流程规范04污染防控措施05应用领域实践06前沿技术发展

01技术基础概念

定义与核心特点动物细胞培养技术是一种在无菌、适当温度及一定营养条件下，模拟机体内环境，使离体动物细胞在培养瓶中生长、繁殖并维持其结构和功能的技术。定义无菌操作、细胞生长环境的模拟与调控、细胞遗传特性的保持等。核心特点

细胞培养主要类型半贴壁细胞培养介于贴壁与悬浮之间，细胞既可贴壁生长，也可悬浮生长。03细胞在培养液中悬浮生长，如某些肿瘤细胞及杂交瘤细胞。02悬浮细胞培养贴壁细胞培养细胞贴附于培养基质表面生长，如大部分正常细胞。01

培养基本原理细胞生长与分裂细胞分化与功能细胞代谢与营养细胞适应与应激在适宜条件下，细胞可进行有丝分裂，实现数量增殖。细胞在培养过程中可发生分化，形成不同种类和功能的细胞。细胞需不断从环境中摄取营养物质，进行代谢活动，以维持其生命活动。细胞在培养过程中需适应新环境，并对外界刺激作出反应。

02培养体系构建

基础培养基提供细胞生长所需的营养物质，如葡萄糖、氨基酸、维生素等。生长因子与激素针对特定细胞类型，添加适量的生长因子和激素，以促进细胞增殖和分化。血清与血浆提供细胞生长所需的激素、生长因子、附着因子等，同时具有抑制细胞毒性物质的作用。无机盐与微量元素钙、镁、锌等无机盐和微量元素对于细胞生长和代谢至关重要。培养基组成要求

培养器皿选择标准材质玻璃或塑料等透明、无毒、易于清洗和消毒的材质。01表面处理培养皿表面需经过特殊处理，以促进细胞附着和生长。02规格与形状根据细胞类型和培养需求选择合适的培养皿规格和形状，如培养瓶、培养板等。03透气性培养器皿需具有一定的透气性，以满足细胞对氧气的需求。04

环境参数控制温度气体环境湿度光照细胞培养需保持恒定的温度，一般在37℃左右，以确保细胞正常代谢和生长。保持适宜的环境湿度，有助于维持细胞活性和形态。细胞培养需提供稳定的气体环境，如空气、氧气和二氧化碳等，以满足细胞呼吸和代谢的需求。根据不同细胞类型，提供适宜的光照条件，如光照强度、光照时间等，以促进细胞生长和分化。

03操作流程规范

细胞复苏将冷冻保存的细胞迅速解冻，使用细胞培养液进行洗涤和稀释，然后接种到培养瓶中，置于适宜的温度和环境下培养。细胞复苏与传代步骤细胞传代当细胞在培养瓶中增殖到一定密度时，需要进行传代培养，以避免细胞老化和接触抑制。传代培养的方法包括机械刮取、酶消化等，具体方法根据细胞类型而定。细胞计数在细胞传代或实验前，需要对细胞进行计数，以确定细胞数量和活力。

使用前需对无菌室进行彻底的消毒和清洁，包括空气、地面、墙面和所有接触的物品。无菌操作关键技术无菌室准备使用前需对器材进行高压蒸汽灭菌或紫外线消毒，确保无菌。无菌操作器材包括细胞培养液的配制、细胞的接种、传代和收获等，都需在无菌条件下进行，避免细胞污染。无菌操作技术

细胞冻存与复苏要点当细胞需要长期保存时，可以进行冻存。冻存前需对细胞进行特殊处理，如使用冻存液等，然后放入液氮罐中保存。细胞冻存复苏时需快速解冻细胞，并尽快将细胞接种到培养瓶中，避免细胞在解冻过程中受损。复苏后的细胞需进行观察和培养，确保其活力和增殖能力。细胞复苏

04污染防控措施

常见污染源分析外部污染源包括环境中的微生物、化学物质、颗粒物等，可能通过空气、水、人员等途径进入细胞培养体系。01内部污染源细胞自身代谢产生的废物、细胞碎片以及培养基中的成分分解产物等，可能抑制细胞生长或引起污染。02潜在污染源细胞培养过程中使用的试剂、耗材等，如果受到污染或保存不当，也可能成为污染源。03

微生物污染预防定期消毒对细胞培养箱、操作台等关键区域进行定期消毒，减少环境中的微生物数量。03对培养基进行严格的灭菌处理，防止其中的微生物污染细胞。02培养基灭菌无菌操作技术严格遵循无菌操作规程，使用无菌器材和试剂，确保细胞培养过程中的无菌环境。01

交叉污染应急处理一旦发现污染，应立即将污染物与未污染物品隔离，防止污染扩散。污染物处理紧急消毒细胞拯救对可能被污染的区域和物品进行紧急消毒处理，以杀死或去除污染微生物。对于被污染的细胞，应根据污染情况采取相应的拯救措施，如使用抗生素、更换培养基等。同时，应密切关注细胞状态，及时采取措施防止污染进一步扩大。

05应用领域实践

生物制药生产应用细胞株的筛选选择具有高表达目标产物的细胞株，提高生产效率胞大规模培养采用生物反应器进行大规模细胞培养，满足工业化生产需求。细胞培养条件优化通过调整培养基、温度、pH值等条件，提高细胞生长速度和产物产量。细胞产物的分离纯化采用有效的分离纯化技术，从细胞培养液中获取目标产物。

组织工程研究场景细胞外基质的构建利用细胞培养技术制