低速逆流色谱法：萝卜籽中硫代葡萄糖苷制备分离的创新探索.docxVIP

低速逆流色谱法：萝卜籽中硫代葡萄糖苷制备分离的创新探索

一、引言

1.1研究背景与意义

硫代葡萄糖苷（简称硫苷）是一类广泛存在于十字花科植物中的含硫阴离子亲水性天然产物，是植物体内重要的次生代谢产物。在已发现的120多种硫代葡萄糖苷中，不同种类在侧链R基团的结构和长度上存在差异，这种结构的多样性决定了其生物活性的丰富性。大量实验研究表明，硫代葡萄糖苷具有抗氧化、抑菌和抗癌等显著的生物活性。其在抗癌方面，能够诱导PhaseⅡ（致癌因子解毒）酶类的产生，阻断致癌物产生致癌效应所需的代谢途径，阻止致癌物或其代谢物进入靶细胞，并清除致癌物，还能抑制癌细胞的分裂与生长，对肺癌、食管癌、前胃癌、肝癌、乳腺癌等多种癌症均有明显的抑制作用。在抑菌方面，对常见的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等有害菌具有抑制效果，可应用于食品保鲜和防腐领域。在抗氧化方面，能有效清除体内自由基，减缓细胞氧化损伤，对预防衰老和一些慢性疾病具有积极意义。

萝卜籽作为十字花科植物萝卜的干燥成熟种子，硫代葡萄糖苷含量尤为丰富，约占种子总重的1%-2%。从萝卜籽中分离制备硫代葡萄糖苷，对于医药领域来说，可提供具有潜在抗癌、抑菌等功效的天然活性成分，为新型药物的研发提供原料，有助于开发高效、低毒的抗癌药物，为癌症患者带来新的治疗选择；在食品领域，可作为天然的抗氧化剂和防腐剂，用于食品保鲜和品质提升，满足消费者对天然、健康食品添加剂的需求；在农业领域，其降解产物可用于开发绿色农药，减少化学农药的使用，降低环境污染。

传统的硫代葡萄糖苷分离方法如柱色谱法、高效液相色谱法等，存在分离效率低、成本高、样品损失大等问题。低速逆流色谱法作为一种不用固态支撑体或载体的液液分配色谱技术，具有分离效率高、样品回收率高、无不可逆吸附、能实现连续高效的分离和制备等优势。它利用样品在互不相溶的两相溶剂中分配系数的差异进行分离，避免了传统色谱法中固体载体对样品的吸附和污染，特别适合天然产物中复杂成分的分离。将低速逆流色谱法应用于萝卜籽中硫代葡萄糖苷的分离，有望克服传统方法的不足，提高分离效率和纯度，为硫代葡萄糖苷的大规模制备和应用提供技术支持。因此，本研究具有重要的理论和实际意义，对于推动硫代葡萄糖苷在多个领域的应用和发展具有积极作用。

1.2国内外研究现状

国内外对于硫代葡萄糖苷的提取分离研究已取得了一定的进展。在提取方法上，常见的有溶剂提取法、酶解法、超临界流体萃取法等。溶剂提取法是最常用的方法之一，通过选择合适的溶剂，如乙醇、甲醇等，将硫代葡萄糖苷从植物组织中溶解出来。研究表明，采用乙醇溶剂法提取萝卜籽中硫苷，通过单因素实验和正交优化试验，得到最佳工艺条件为脱脂预处理、乙醇浓度为70％、料液比为1：5、提取时间为20min、提取温度为70℃、提取次数为3次，此时可得到硫苷含量占42.88％的萝卜籽粗提物。酶解法利用内源芥子酶或外源添加的芥子酶，使硫代葡萄糖苷发生酶解反应，生成具有生物活性的降解产物，这种方法在获得特定降解产物方面具有优势。超临界流体萃取法以超临界流体（如二氧化碳）为萃取剂，具有萃取效率高、速度快、无污染等优点，但设备成本较高，限制了其大规模应用。

在分离纯化方面，柱色谱法、高效液相色谱法（HPLC）、薄层色谱法（TLC）等传统方法应用广泛。柱色谱法通过选择不同的固定相和洗脱剂，对硫代葡萄糖苷进行分离，但分离效率相对较低，且容易造成样品的损失和污染。HPLC具有分离效率高、分析速度快、灵敏度高等优点，能够对硫代葡萄糖苷进行精确的分离和定量分析，但仪器昂贵，运行成本高，且样品处理量有限。TLC操作简单、成本低，但分离效果相对较差，主要用于定性分析。

近年来，逆流色谱技术作为一种新型的分离技术，在天然产物分离领域得到了越来越多的关注。逆流色谱包括高速逆流色谱（HSCCC）和低速逆流色谱（SRCCC）。高速逆流色谱利用高速旋转产生的离心力场，使互不溶的两平衡相在色谱柱内进行剧烈混合与分相，形成连续的混合区与分相区实现萃取过程，再利用不同物质在溶剂系统的分配系数不同进行多级萃取分离与提纯。已有研究应用高速逆流色谱技术分离油菜籽中的硫代葡萄糖苷，找到了合适的溶剂系统正丁醇-乙腈-10%硫酸铵溶液（1：0.5：2.2），采用柱容积200ml的HSCCC-D200型高速逆流色谱仪分离400mg油菜籽粗提物，得到136mga2组分（主要为烯丁基硫苷）和47.2mgb组分（主要为2-羟基-3-烯丁基硫苷），分离时间8.5小时。低速逆流色谱则相对转速较低，具有设备成本低、操作简单、易于放大等优点。在天然产物分离中，低速逆流色谱已成功应用于一些复杂成分的分离，如从中药材中分离活性成分等，但在萝卜籽中硫