ssDNA EXO测试及Tdt复测实验方案.pdfVIP

2‑11‑13

Tdt复测

5

组分1234

10x缓冲液1ul1ul1ul1ul1ul

氯化钴1ul1ul1ul1ul1ul

1.5微升

10毫摩尔脱氧腺1.5微1ul1.5微升1.5微升

苷三磷酸升FAM寡核苷酸外切酶I处理非ExoIFAM寡核苷酸

FAM寡核苷酸(1:4)1微升FAM寡核苷酸处理过的FAM(1:4)1微升

样本(1:4)1微升1ulOligo1微升

NEBTdtNEBTdtNEBTdtNEBTdt0

酶0.5微升0.5微升0.5微升0.5微升

H2O5ul5.5微5ul5ul5.5微

升

升

总共10微升37摄氏度x45分钟加入0.5微升500毫摩尔EDTA，混

合比例1:0，1:2稀释片段分析（单独的行和列，每个反应加两个孔）

2‑13‑13

10XTABuffer:330毫摩尔Tris‑乙酸（pH7.5），660毫摩尔乙酸钾，100毫摩尔乙酸镁

和5毫摩尔DTT

ss处理：

10xTA1微升MC

ExoI15u/0u

FAM‑寡核苷酸2微升

LTEx总体积10微升

37°C反应10分钟，

80°C反应15分钟

酶体积

T4聚合酶5ul

对照5微升（相同单位）

聚合酶Klenow片段5ul

对照5微升（相同单位）

–5ul

Klenow片段（3´→5´exo）

对照5微升(sameunit)

2-11-13

Tdtretest