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菊花miR156靶基因CmSPLs功能解析：从分子特征到生理调控

一、引言

1.1研究背景与目的

1.1.1研究背景

在植物的生长发育进程中，miR156及其靶基因SPLs（SQUAMOSAPROMOTERBINDINGPROTEIN-LIKE）扮演着极为关键的角色。miR156属于微小核糖核酸（microRNA，miRNA）家族，这类非编码小分子RNA长度约21-24个核苷酸，虽不具备编码蛋白质的能力，却能借助对靶基因mRNA的切割或翻译抑制，在转录后水平精准调控基因表达。大量研究表明，miR156在植物的多个生长阶段发挥着重要作用，如调控营养生长阶段的幼年期向成年期转变，对植物开花时间和花器官发育的调控等。在植物的生长初期，miR156的表达水平相对较高，它通过抑制SPLs基因的表达，维持植物处于幼年期，此阶段植物通常表现为叶片形态简单、无生殖器官发育等特征。随着植物的生长，miR156的表达量逐渐降低，对SPLs基因的抑制作用减弱，SPLs基因得以表达，从而促使植物进入成年期，这一时期植物叶片形态发生变化，同时具备了生殖生长的能力。在拟南芥中，过量表达miR156会导致植株延迟开花，且花器官发育异常；相反，降低miR156的表达水平，则会使植株提前开花。

SPLs基因家族编码的蛋白是一类含有SBP结构域的转录因子，它们能够特异性地结合到靶基因启动子区域的顺式作用元件上，调控下游基因的表达，进而影响植物的生长发育进程。SPLs基因家族成员众多，不同成员在植物的不同组织和发育阶段呈现出特异性的表达模式，各自承担着独特的生物学功能。例如，某些SPL成员参与调控植物的株型建成，影响植株的高度、分枝数量等；还有些成员在植物的果实发育、种子萌发等过程中发挥关键作用。在玉米中，SPL13基因参与调控玉米的穗发育，对玉米的产量有着重要影响。

菊花（Chrysanthemummorifolium）作为世界著名的观赏花卉之一，在观赏植物研究领域占据着重要地位。其花色丰富，涵盖白、黄、紫、红等多种颜色；花型多样，有单瓣、重瓣、飞舞型等；花期也各不相同，从春季到秋季均有不同品种的菊花开放。菊花不仅具有极高的观赏价值，还承载着深厚的文化内涵。在中国，菊花被誉为“花中四君子”之一，象征着高洁、长寿等美好寓意，常被用于诗词、绘画等艺术创作中，深受人们喜爱。在日本，菊花同样备受尊崇，是日本皇室的象征，菊花节也是日本的重要传统节日之一。在花卉产业中，菊花的种植面积和销售额在全球观赏花卉市场中名列前茅，是重要的经济作物。然而，传统的菊花育种方法在改良某些性状时存在局限性，如对花期的精准调控、对病虫害抗性的提高等。随着现代生物技术的飞速发展，深入研究菊花的生长发育机制，挖掘关键基因并解析其功能，成为实现菊花遗传改良的关键。

1.1.2研究目的

本研究旨在对菊花miR156靶基因CmSPLs的功能进行初步鉴定。通过生物信息学分析，从菊花基因组中筛选出miR156的潜在靶基因CmSPLs，并对其基因结构、保守结构域、系统进化关系等进行深入分析，以了解CmSPLs基因家族的基本特征。运用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术，检测不同组织和发育阶段中CmSPLs基因的表达模式，明确其在菊花生长发育过程中的时空表达规律。构建过表达载体和RNA干扰载体，通过农杆菌介导的遗传转化技术，获得过表达和干扰CmSPLs基因的菊花转基因植株。通过对转基因植株的表型分析，包括株型、开花时间、花器官形态等方面的观察，初步明确CmSPLs基因在菊花生长发育中的功能。本研究期望为菊花的遗传育种提供重要的理论依据，为培育具有优良性状的菊花新品种奠定基础。

1.2国内外研究现状

在植物中，miR156和SPLs基因家族的研究取得了丰硕的成果。在模式植物拟南芥中，已鉴定出多个miR156的靶基因，如SPL3、SPL4、SPL5等。研究发现，miR156-SPLs模块在调控拟南芥的幼年期向成年期转变以及开花时间方面发挥着核心作用。随着植物的生长，miR156的表达量逐渐下降，使得SPLs基因的表达得以释放，SPL3、SPL4和SPL5等能够直接激活下游开花相关基因FT（FLOWERINGLOCUST）和SOC1（SUPPRESSOROFOVEREXPRESSIONOFCONSTANS1）的表达，从而促进植物开花。在水稻中，研究人员通过基因编辑技术敲除或过表达miR156及其靶基因，发现该模块对水稻的分蘖、穗发育和株型等重要农艺性状有着显著影响。过表达miR156会导致水稻分蘖数增加，但穗粒数减少；而敲低miR1