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基于TRV-VIGS技术解析菊花脑滞绿基因CnSGR1功能奥秘

一、引言

1.1研究背景

植物叶片衰老黄化失绿是一个复杂的生理过程，受到多种内外因素的精细调控，在植物的生长发育、物质代谢和适应环境变化中发挥着重要作用。外界环境因素如光照、温度、水分和养分等，都会显著影响叶片衰老进程。例如，光照不足会导致叶片光合作用减弱，加速叶片衰老；极端温度条件会破坏叶片细胞的结构和功能，促使叶片提前衰老。植物激素在叶片衰老过程中也起着关键的调节作用，脱落酸（ABA）、乙烯等通常会促进叶片衰老，而细胞分裂素则具有延缓叶片衰老的作用。在叶片衰老过程中，植物的生理生化会发生一系列显著变化，叶绿素含量逐渐下降，使得叶片失去绿色而变黄；蛋白质含量减少，影响叶片的正常生理功能；光合作用能力逐渐衰退，导致植物合成有机物质的能力下降。

滞绿（Stay-green）现象作为植物叶片衰老过程中的一种特殊表现，引起了众多研究者的关注。滞绿突变体表现为叶片衰老进程延缓，叶绿素降解受阻或降解速度显著减慢，从而使叶片在较长时间内保持绿色。根据滞绿的分子机制和生理特征，可将滞绿类型主要分为功能型滞绿和非功能型滞绿。功能型滞绿突变体不仅叶片外观保持绿色，而且在衰老过程中仍能维持较高的光合活性和生理功能；非功能型滞绿突变体虽然叶片保持绿色，但光合功能可能已经受损，只是叶绿素降解途径受到了干扰。

滞绿基因（Staygreen）在植物滞绿现象中起着核心作用，是调控叶片衰老和叶绿素降解的关键因子。随着分子生物学技术的飞速发展，越来越多的滞绿基因被成功克隆和深入研究。这些滞绿基因在不同植物物种中存在一定的序列差异和功能分化，但它们大多参与了叶绿素降解途径的调控。在拟南芥、水稻、玉米等模式植物中，滞绿基因的功能研究取得了丰硕成果，揭示了滞绿基因在调控叶绿素降解、维持光合系统稳定性和影响植物生长发育等方面的重要作用。然而，对于许多其他植物，尤其是一些具有重要经济价值和独特生物学特性的植物，滞绿基因的研究仍相对匮乏，菊花脑便是其中之一。

菊花脑（Chrysanthemumnankingense），又名路边黄、菊花叶、黄菊仔等，是菊科菊属多年生宿根草本植物，为草本野生菊花的近缘植物。菊花脑原产于中国，在江苏、湖南、贵州等地有野生种分布，苏南地区种植历史悠久，如今在我国西部地区以及北方地区也有种植，主要栽培品种有小叶菊花脑和板叶菊花脑。菊花脑嫩茎、叶具特殊清香味，可炒食或汤食，是高温季节重要的绿叶蔬菜，富含蛋白质、脂肪、总糖等成分，还具有清热解毒、平肝明目、调中健脾开胃、降血压等药用保健功能，可治疗便秘、高血压、头痛目赤等疾病，对抑制病原微生物、细菌、病毒及皮肤真菌生长有较好作用，可辅助治疗皮肤病，被誉为高档营养保健蔬菜。

在菊花脑的生长发育过程中，叶片衰老黄化失绿现象同样不可避免，这不仅影响菊花脑的产量和品质，还可能对其药用价值和经济价值产生负面影响。然而，目前关于菊花脑滞绿基因的研究几乎处于空白状态，对其滞绿现象的分子机制和调控网络知之甚少。因此，开展菊花脑滞绿基因的研究具有重要的理论意义和实际应用价值，不仅有助于深入揭示菊花脑叶片衰老的分子调控机制，丰富植物滞绿基因的研究内容，还为菊花脑的遗传改良和品种选育提供重要的理论依据和基因资源，具有重要的理论与实际意义。

1.2研究目的与意义

本研究旨在利用病毒介导的基因沉默（VIGS）技术，以烟草脆裂病毒（TRV）为载体，对菊花脑滞绿基因CnSGR1进行功能鉴定。通过克隆菊花脑滞绿基因CnSGR1，分析其序列特征和表达特性，构建TRV-VIGS载体并转化菊花脑，获得CnSGR1基因沉默的菊花脑植株，进而从生理生化和分子生物学水平研究CnSGR1基因沉默对菊花脑叶片衰老、叶绿素降解等生理过程的影响，明确CnSGR1在菊花脑叶片衰老调控中的功能和作用机制。

本研究具有重要的理论意义。在植物叶片衰老机制研究领域，滞绿基因的功能解析一直是研究热点。菊花脑作为一种具有独特生物学特性和重要经济价值的植物，其滞绿基因的研究将为植物叶片衰老调控机制的研究提供新的视角和理论依据，有助于深入揭示植物滞绿现象的分子本质，完善植物叶片衰老的调控网络。通过对CnSGR1基因的研究，能够进一步明确滞绿基因在不同植物物种中的进化关系和功能保守性，为植物滞绿基因的系统研究提供重要参考。

本研究还具有显著的实际应用价值。在农业生产中，叶片衰老黄化会导致作物产量降低、品质下降。通过对菊花脑滞绿基因CnSGR1的功能鉴定，可为菊花脑的遗传改良和品种选育提供关键的基因资源和技术支持。利用基因工程手段调控CnSGR1基因的表达，有望培育出具有延缓叶片衰老特性的菊花脑新品种，从而提高菊花脑的产量和品质，延长其采收期和保鲜期，增加农民