血筛核酸实验室污染预防及发生后的应对措施策略.pptxVIP

;行政主管部门颁布文件;

;一、影响NAT实验室污染因素;;;;;;;;独立的通风

系统;;二、核酸实验室污染的判断和预防;;;;;;完备的实验室配套设施;反应在同一管中进行

加入油密闭的反应体系

扩增产物RNA易于灭活

;封闭的实验环境

方便快捷的试剂装载

试剂分配区、样本分配区相互隔离

扩增反应管的密封性能

实验废弃物收集区相对隔离;6样本混合PCR检测方法;什么是“UMG酶”;UNG酶的作用原理：

是选择性水解断裂含有dU的双链或单链DNA中的尿嘧啶糖苷键，形成的有缺失碱基的DNA链，在碱性介质以及高温下会进一步水解断裂，从而被消除。

作用：

为保证PCR结果的准确性，预防非特异性PCR扩增和污染。常用的措施是使用UNG酶(Uracil-N-Glycosylase)和Taq酶热启动。PCR反应最常见,最重要的污染物是PCR产物,防污染热启动PCR试剂盒以dUTP取代dTTP，所以PCR产物都是含有dU的DNA链。在PCR开始前增加50℃的保温步骤，UNG酶即可将反应体系中已有的U-DNA污染物中的尿嘧啶碱基降解，并在随后变性这步的条件下DNA链断裂,消除由于污染DNA产生的扩增，从而保证扩增结果的特异性，准确性。

;;样本管上机检测是均是闭管状态，有效避免样品间的交叉污染;严格执行核酸检测工作要求

克服血清学检测的工作习惯;;细致的工作流程

正确的上样方式。

正确的试剂装载方式

正确的仪器设备维护方式

正确的医疗废物处理方式;;;;严格的管理---制定可操作性的SOP;

离心后的标本应垂直放置；

标准品和指控品开盖前垫一次性纸巾；

上样时不碰到试管口；

试管不可从开盖标本上方经过；

注意上样的顺序，先放置样本，再放标准品、质控品；;

及时更换可能污染的手套，不可反复使用一次性手套

完成加样后标本、标准品、质控品应及时加盖；

丢弃试剂前应该加盖拧紧；

应及时封闭污物袋；

;将样品和标准品、对照品去掉盖子，按照工作列表插入样品架避免交叉污染；

实验中须使用一次性手套，手套在实验过程中疑有污染应立即更换，每个区的物品均有明确标示，各室物品不得混用。

避免因不能戴上手套而用手反复搓揉手套或用口吹胀手套的行为；

实验人员经过全国血液病毒???酸检测培训班培训并取得上岗证；

每天清洁一遍工作台面，每月彻底维护清洁一遍检测系统（包括分析设备，电脑，辅助设备等）；;;三、核酸实验室污染的消除;;;标本污染实验室台面后，用纸巾初步清洁台面，然后用84消毒原液清洗，用去离子水清洁。

使用75%的酒精清洁污染处。

停止使用被污染的工作台，按《可移动紫外线灯标准操作规程》进行紫外消毒。

每天0.5％84消毒液清洁地面。

;清洁实验室墙面、地面、工作台面。

对空气用紫外灯进行消毒

清理工作台面多余的物品（如文件盒、文具、各种与实验无关的物品）。

检查更换空调滤网、对空调、天花板进行清洁消毒。

检查各实验室间的空气流通是否独立。

定期（每周一次）消毒离心机、离心杯、上样试管架。;污染清除后的确认;四、核酸实验室污染的监控及对策;;试管架的浸泡消毒;;;;

好的核酸实验室，要时刻注意污染的监测并制订有效的防范机制

有无污染？

什么原因造成的污染？

采取什么措施，防止和消除污染？;设立阴、阳性对照，即可验证核酸检测的可靠性，又可以协助判断扩增系统的可信性

选择阳性对照时，应选择扩增弱，且重复性好的样品

如果扩增结果中阴性对照为阳性反应，就是某一种或数种试剂被污染了，此时要全部更换一批新的试剂进行扩增。

;定期监控室内环境;定期对仪器设备的运行环境进行监控;污染的监测???

一个好的实验室，要时刻注意污染的监测，考虑有无污染是什么原因造成的污染，以便采取措施，防止和消除污染。????;采集时间;室内质量控制在使用试剂方面要做到4个必须

1）必须保证使用试剂中有内标的存在;

2）必须保证试剂存放符合要求，防止污染导致假阳性的出现;

3）必须采用阴性对照，以判断核酸实验室是否遭受污染

4）必须每个检测批次都应有阳性对照，且阳性对照的浓度不宜过高，约为仪器检测下限3-5倍左右，以监测核酸提取的有效性

5）卫生部临床检验中心组织的全国血站核酸扩增检测项目的室间质量评价

如果实验室同时运行1个以上的独立的核酸检测系统，则需分别参加室间质量评价

;认真细致

精益求精

防微杜渐