原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
演讲人：
微生物检验实验操作指南
目录
01.
实验前准备
02.
样本采集与处理
03.
微生物培养技术
04.
鉴定与药敏试验
05.
质量控制管理
06.
实验室安全防护
实验前准备
01
样本标识与信息核对
样本完整性检查
接收样本时需严格核对样本标签信息，包括样本编号、来源、类型及检测项目，确保与送检单一致，避免混淆或遗漏关键信息。
检查样本容器是否完好无损，是否存在泄漏或污染迹象，记录样本状态（如凝固、溶血等），异常情况需及时反馈并登记备注。
样本接收与登记流程
登记系统录入
将样本信息录入实验室信息管理系统（LIMS），生成唯一实验编号，同步记录接收时间、操作人员及特殊处理要求，确保数据可追溯。
样本分类与暂存
根据检测项目对样本进行分类，需低温保存的样本应立即转移至指定冷藏或冷冻区域，并标注保存条件及有效期。
试剂与耗材核查清单
建立关键试剂（如培养基、染色液）的备用库存，定期检查补充，防止实验中断。
紧急备用物资清单
确认标准品浓度、质控品批号及靶值范围，提前复溶或平衡至室温，避免因操作延迟影响检测准确性。
标准品与质控品准备
检查培养皿、移液管、离心管等耗材的包装完整性及灭菌标识，确保无菌状态，必要时进行无菌测试验证。
耗材无菌性验证
核对所有试剂的生产批号、有效期及储存条件（如避光、-20℃保存等），过期或变质试剂需标记隔离并更换。
试剂有效期与储存条件
对PCR仪、酶标仪、生物安全柜等设备进行开机自检，确认温度、压力、光路等参数符合标准，运行质控程序验证性能。
大型设备运行验证
确保培养箱、冰箱的温度记录仪正常运行，校准CO₂浓度传感器，并备份历史数据以备审计。
环境监测设备检查
01
02
03
04
对移液器、天平、pH计等基础设备进行每日使用前校准，记录偏差值，超出允许范围需暂停使用并报修。
基础仪器校准
查阅设备近期维护日志，制定突发故障应急方案（如备用设备调用），确保实验流程不受影响。
维护记录与故障预案
仪器设备校准确认
样本采集与处理
02
血液样本采集
晨起中段尿为佳，采集前需清洁外阴，使用无菌容器盛放，2小时内送检；24小时尿需添加防腐剂（如甲苯），记录总尿量并混匀后取10ml送检。
尿液样本采集
痰液样本采集
清晨深咳痰液，无菌容器收集，避免唾液污染；无法自主咳痰者可采用吸痰术，采样后立即送检或冷藏保存（不超过2小时）。
使用无菌真空采血管，优先选择肘正中静脉，穿刺前需消毒皮肤（75%酒精两次消毒），采血量根据检测项目调整（常规生化需3-5ml，血培养需8-10ml），避免溶血或凝血。
不同样本类型采集规范（血液/尿液/痰液）
样本预处理与均质化操作
分装与保存
预处理后样本按检测需求分装至冻存管，标记清晰；短期保存置于4℃，长期保存需-80℃超低温冰箱，避免反复冻融。
均质化处理
组织样本需剪碎后加入生理盐水或PBS缓冲液，使用匀浆器研磨至无肉眼可见颗粒；痰液样本可加入等体积1%胰蛋白酶溶液消化30分钟以提高检出率。
离心分离技术
血液样本需3000rpm离心10分钟分离血清/血浆，尿液样本需2000rpm离心5分钟去除沉淀，离心温度控制在4℃（特殊项目如冷球蛋白需25℃）。
生物安全柜使用
操作前紫外线消毒30分钟，工作台面用75%酒精擦拭；样本处理时保持前窗开口高度≤20cm，避免频繁移动手臂造成气流紊乱。
无菌操作技术要点
个人防护措施
穿戴一次性口罩、帽子、无菌手套及防护服，接触传染性样本时需加戴护目镜；操作后手套需消毒后再丢弃（0.5%含氯消毒液浸泡）。
器械灭菌管理
金属器械采用高压蒸汽灭菌（121℃、15psi维持20分钟），塑料耗材使用环氧乙烷或γ射线灭菌，每周监测灭菌效果（生物指示剂检测）。
微生物培养技术
03
培养基选择与配制标准
培养基类型选择
根据目标微生物特性选择基础培养基（如营养琼脂）、选择性培养基（如麦康凯琼脂）或鉴别培养基（如伊红美蓝琼脂），需考虑微生物的营养需求和生长特性。
01
成分精确称量
严格按照配方称量蛋白胨、牛肉膏、氯化钠等成分，误差控制在±1%以内，避免因浓度偏差导致微生物生长抑制或污染。
pH值调节与灭菌
配制完成后用pH计校准至7.2-7.4（细菌培养常用范围），121℃高压灭菌15-20分钟，灭菌后需进行无菌测试验证效果。
分装与储存规范
灭菌后培养基分装至无菌平皿或试管，避免二次污染；暂时不用的培养基需密封后4℃保存，有效期不超过2周。
02
03
04
四区划线操作
首次划线覆盖平板1/4区域，后续每次划线旋转90度且仅接触前一区末端1-2次，最终实现单菌落分离，要求划线间距均匀、力度适中避免划破培养基。
样本量控制
液体样本取10μL，固体样本需预先乳化，确保划线时菌液浓度适中，避免因菌量过多导致融合生长。
异常情况处理
文档评论（0）