从细胞重编程到基因矫正：OTOF基因突变所致耳聋的iPSC治疗新路径.docxVIP

从细胞重编程到基因矫正：OTOF基因突变所致耳聋的iPSC治疗新路径

一、引言

1.1研究背景与意义

听力障碍是一种常见的感官缺陷，严重影响患者的生活质量与社会交流。据世界卫生组织统计，全球约有4.66亿人存在不同程度的听力损失，其中大部分为感音神经性耳聋。感音神经性耳聋的病因复杂，包括遗传、环境及两者相互作用等多种因素，而遗传因素在其中占据重要地位，约50%的先天性耳聋由遗传因素导致。

OTOF基因编码的耳畸蛋白（otoferlin）在听觉信号传递过程中发挥着关键作用。该基因的突变是导致常染色体隐性遗传性耳聋9型（DFNB9）的主要原因。耳畸蛋白主要负责内耳毛细胞突触囊泡的融合与递质释放，当OTOF基因发生突变时，内耳毛细胞无法正常释放神经递质，导致听觉信号无法有效传递至大脑，患者出现重度至极重度听力损失，严重影响语言发育和生活质量。

目前，针对OTOF基因突变所致耳聋的主要治疗方法是人工耳蜗植入。然而，人工耳蜗只能将声音转化为电信号刺激听觉神经，存在音质失真、噪声环境下识别困难等局限，无法从根本上解决听觉信号传递异常的问题，难以让患者获得自然听觉体验。因此，寻找一种能够从根源上治疗OTOF基因突变所致耳聋的方法具有重要的临床意义和社会价值。

诱导性多能干细胞（inducedpluripotentstemcells，iPSC）技术的出现为耳聋治疗带来了新的希望。iPSC是通过导入特定转录因子，将体细胞重编程为具有与胚胎干细胞相似多能性的细胞。iPSC具有自我更新和多向分化的潜能，在一定条件下可定向分化为内耳毛细胞、听神经等听觉相关细胞。利用患者自身细胞诱导生成iPSC，不仅可以避免免疫排斥反应，还为研究疾病发病机制和开发个性化治疗方案提供了理想的细胞模型。

基因矫正技术，如CRISPR/Cas9系统，能够对特定基因突变进行精准修复，为治疗遗传性疾病提供了有力工具。将iPSC技术与基因矫正技术相结合，有望实现对OTOF基因突变所致耳聋患者细胞的基因修复，并进一步分化为功能正常的听觉细胞，为耳聋的治疗提供新的策略和方法。

本研究旨在建立OTOF基因突变所致耳聋患者来源的iPSC，并利用基因矫正技术对突变基因进行修复，为深入研究耳聋发病机制和开发新型治疗方法奠定基础，有望为广大耳聋患者带来福音，具有重要的科学意义和临床应用前景。

1.2研究目的与创新点

本研究的主要目的是成功建立OTOF基因突变所致耳聋患者来源的诱导性多能干细胞（iPSC）系，并运用先进的基因矫正技术对OTOF基因突变进行精准修复，为后续深入研究耳聋的发病机制以及开发有效的治疗策略提供坚实的实验基础和细胞模型。具体而言，通过从患者体内获取体细胞，采用特定的重编程技术将其转化为iPSC，使其具备多向分化的潜能；然后，利用CRISPR/Cas9等基因编辑工具，针对OTOF基因的突变位点进行精确矫正，使基因恢复正常功能；最后，对基因矫正后的iPSC进行定向分化，诱导其形成内耳毛细胞或听神经等听觉相关细胞，观察细胞的功能恢复情况，验证基因矫正的有效性。

本研究的创新点主要体现在以下几个方面：首先，首次针对OTOF基因突变所致耳聋患者进行iPSC的建立与基因矫正研究，为该特定类型耳聋的治疗开辟了新的研究方向。此前，虽然iPSC技术和基因矫正技术在其他遗传性疾病的研究中取得了一定进展，但在OTOF基因突变相关耳聋领域的应用尚属前沿探索，本研究有望填补这一领域的空白。其次，在基因矫正过程中，将尝试优化CRISPR/Cas9系统的靶向策略，提高基因编辑的效率和准确性，降低脱靶效应，为基因治疗技术的发展提供新的思路和方法。此外，本研究不仅关注基因矫正的技术突破，还将深入研究基因矫正后iPSC向听觉相关细胞分化的机制，为全面理解耳聋的发病机制和治疗靶点提供新的视角，有助于开发更加精准、有效的个性化治疗方案，具有重要的理论意义和临床应用价值。

1.3国内外研究现状

在OTOF基因突变所致耳聋的研究方面，国内外学者已取得了一定成果。研究明确了OTOF基因在听觉信号传递中的关键作用，其编码的耳畸蛋白参与内耳毛细胞突触囊泡的融合和神经递质释放过程。不同类型的OTOF基因突变与耳聋的表型之间存在一定关联，例如某些突变可导致先天性重度至极重度听力损失。在临床诊断上，基因检测技术已广泛应用于OTOF基因突变的筛查，为早期诊断和遗传咨询提供了重要依据。然而，目前对于OTOF基因突变所致耳聋的治疗手段仍较为有限，主要依赖人工耳蜗植入等方式，但这些方法存在诸多局限性，无法从根本上解决听觉信号传递异常的问题。

在诱导性多能干细胞（iPSC）技术应用于耳聋研究领域，