专题03 基因工程的基本工具和基本操作程序 高二生物下学期期中考点（人教版2019）.pptxVIP

人教版高二生物期中复习考点串讲第三讲基因工程的基本工具和基本操作程序

考点梳理目录考点梳理要点概览0201考点一、重组DNA技术的基本工具考点三、DNA的粗提取与鉴定提升检测03考点二、基因工程的基本操作程序

要点概览限制性内切核酸酶基本工具DNA连接酶载体质粒动植物病毒噬菌体操作程序目的基因的筛选与鉴定基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定DNA片段的扩增及电泳鉴定基因工程探究DNA的粗提取与鉴定

考点一：重组DNA技术的基本工具知识梳理1.基因工程(重组DNA技术)概述基因分子水平基因重组赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物制品定向改造生物性状；克服远缘杂交不亲和障碍原理：操作对象：操作水平：结果：意义：重组DNA技术转基因等技术操作技术：

考点一：重组DNA技术的基本工具知识梳理(1)限制性内切核酸酶(也称“限制酶”)2.重组DNA技术的基本工具来源：特点：结果：主要是从原核生物中分离纯化来的识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。②产生平末端①产生黏性末端黏性末端GCAATTTATACG5335GCTTAAAATTCG平末端CGCCGGGCGCGC

考点一：重组DNA技术的基本工具知识梳理(2)DNA连接酶作用：类型：将两个DNA片段连接起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。E.coliDNA连接酶T4DNA连接酶只连接黏性末端缝合黏性末端和平末端（效率较低）来源：大肠杆菌作用：来源：作用：T4噬菌体

考点一：重组DNA技术的基本工具知识梳理DNA连接酶DNA聚合酶相同作用实质化学本质不同点模板作用对象作用结果用途都能催化形成磷酸二酯键都是蛋白质 不需要需要DNA的一条链作模板形成完整的重组DNA分子形成DNA的一条链基因工程DNA复制在两个DNA片段间形成磷酸二酯键将单个核苷酸连接到已有DNA片段，形成磷酸二酯键DNA连接酶和DNA聚合酶

考点一：重组DNA技术的基本工具知识梳理名称作用部位作用底物作用结果限制酶DNA连接酶DNA聚合酶DNA(水解)酶解旋酶RNA聚合酶与DNA有关的酶的比较将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸碱基对之间的氢键DNA将双链DNA分子局部解旋为单链，形成两条长链磷酸二酯键核糖核苷酸将单个核糖核苷酸依次连接到RNA单链末端磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键DNA脱氧核苷酸DNA片段DNA将DNA切成两个片段将两个DNA片段连接为一个DNA分子将单个脱氧核苷酸依次连接到DNA单链末端

考点一：重组DNA技术的基本工具知识梳理(3)载体环状双链DNA分子种类：特点：作用：质粒(常用载体)：将外源基因送入受体细胞,在受体细胞内对目的基因进行大量复制动植物病毒噬菌体①稳定存在并能自我复制，或整合到受体DNA上同步复制②有一个至多个限制酶切割位点③具有特殊的标记基因，便于重组DNA分子的筛选

考点二：基因工程的基本操作程序知识梳理1.目的基因的筛选与获取(1)目的基因：①从相关的已知的基因中进行筛选是较为有效的方法之一结构和功能清晰序列数据库在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。(2)明确目的基因的方法：②利用和序列比对工具进行筛选。

考点二：基因工程的基本操作程序知识梳理1.目的基因的筛选与获取①通过构建基因文库来获取目的基因前提：DNA合成仪基因比较小、核苷酸序列已知通过DNA合成仪用化学方法直接合成③利用PCR特异性地快速扩增目的基因②人工合成目的基因方法：(3)获取目的基因的方法

考点二：基因工程的基本操作程序知识梳理②原理：_________________。复制特定DNA片段DNA半保留复制(4)利用PCR获取和扩增目的基因①含义：是一项在生物体外_____________________的核酸合成技术。③条件：DNA模板：引物(2种):四种脱氧核苷酸：引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸(dNTP)提供DNA复制的模板合成子链DNA的原料TaqDNA聚合酶:缓冲溶液:一般添加Mg2+,激活真核细胞和细菌的DNA聚合酶耐高温的DNA聚合酶(催化形成磷酸二酯键)

考点二：基因工程的基本操作程序知识梳理指数④PCR扩增过程：变性复性延伸90℃以上，双链DNA解聚为单链50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。72℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下合成新的DNA链。⑤PCR的结果：⑥PCR产物的鉴定：常采用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR的产物。每次循环后目的基因的量增加一倍,即成____形式扩