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静态注射化学发光法测定面粉中的过氧化苯甲酰

静态注射化学发光法测定面粉中过氧化苯甲酰的方法研究

一、概述与原理

过氧化苯甲酰（BenzoicAcidPeroxide,BPO）是面粉加工中常见的增白剂，兼具漂白和防腐功能，但其过量使用会对人体健康造成潜在威胁。因此，对面粉中BPO含量的精准检测成为保障食品安全的重点环节。静态注射化学发光法是一种高效、灵敏的分析技术，基于BPO与特定化学发光体系的特异性反应实现定量检测。其核心原理为：当BPO参与目标化学反应时，会引发发光物质（如鲁米诺、光泽精等）的电子跃迁，释放出可见光；化学发光信号的强度与BPO浓度呈正相关关系，通过检测发光信号的强弱，可实现对BPO含量的定量分析。该方法相较于传统检测手段，具有操作简便、响应迅速、检测限低、适用范围广等显著优势，适用于面粉等复杂基质样品的快速筛查。

二、实验仪器与设备

为确保检测结果的准确性，需配备以下关键仪器与设备：

1.化学发光分析仪：采用静态注射模式的化学发光检测系统（如某品牌CL-2000型化学发光仪），具备高灵敏度检测单元、恒温反应池及自动进样装置，能稳定输出化学发光信号并实时记录。

2.微量进样器：10μL、100μL规格，用于精确控制标准品和样品溶液的进样体积，保证进样误差≤±1%。

3.高速离心机：最高转速≥12000r/min，用于分离样品提取液中的固体杂质，确保待测溶液澄清。

4.超声波清洗仪：功率≥250W，频率40kHz，用于加速样品前处理的溶解和分散过程。

5.分析天平：精度0.0001g，用于准确称量面粉样品和试剂。

6.移液器：10mL、1mL、0.5mL规格，用于精确转移液体试剂和样品溶液。

7.恒温水浴锅：控温精度±0.1℃，用于维持化学发光反应体系的温度稳定。

8.玻璃仪器：包括50mL容量瓶、锥形瓶、刻度试管等，均经高温灭菌处理以避免污染。

三、试剂与溶液

（一）主要试剂

1.过氧化苯甲酰标准品：纯度≥99%，购自国家认证的标准物质中心，用于制备标准工作曲线。

2.鲁米诺（Luminol）：化学发光试剂，纯度≥98%，溶于去离子水中配制成浓度为1.0×10?3mol/L的工作液（现用现配，避光保存）。

3.过氧化氢（H?O?）：30%质量分数，作为氧化剂，配制成浓度为1.0×10?2mol/L的工作液。

4.磷酸盐缓冲溶液（pH=9.8）：由Na?HPO?和KH?PO?按一定比例混合配制而成，用于调节化学发光反应体系的pH值，保证反应条件稳定。

5.乙腈：色谱纯，用于样品提取，去除面粉基质的干扰。

6.去离子水：电阻率≥18.2MΩ·cm，用于配制试剂和稀释样品。

（二）溶液配制

1.BPO标准储备液：准确称取10.0mg过氧化苯甲酰标准品，置于50mL容量瓶中，用乙腈-水（体积比1:1）溶解并定容至刻度，摇匀后转移至棕色瓶中冷藏保存（有效期1个月）。

2.BPO标准工作液：取上述储备液，用乙腈-水（体积比1:1）逐级稀释，分别配制浓度为0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL的标准工作液，用于绘制标准曲线。

3.化学发光试剂混合液：取1.0mL鲁米诺工作液、0.5mLH?O?工作液和2.0mLpH=9.8的磷酸盐缓冲溶液，混合均匀后立即使用（因鲁米诺易分解，需现用现配）。

四、样品前处理

（一）样品采集与预处理

选取具有代表性的面粉样品，按照“四分法”随机抽取多个子样，充分混匀后过80目筛，去除大颗粒杂质，确保样品均匀性。

（二）样品提取

称取约2.0g均匀后的面粉样品于50mL锥形瓶中，加入25mL乙腈-水（体积比1:1）溶液，超声萃取15min（功率250W，频率40kHz），随后以4000r/min离心10min，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，得到待测样品溶液。

（三）空白试验

同时进行空白对照实验，除不添加面粉样品外，其余操作与样品前处理完全一致，用于扣除基质干扰和试剂本底信号。

五、实验步骤

（一）仪器初始化与参数设置

1.开启化学发光分析仪电源，预热30min以上，使仪器处于稳定工作状态。

2.设置仪器参数：进样体积为10μL，反应池温度为25℃，增益倍数为1000，积分时间为10s，灵敏度调至最大（保证信号在量程内）。