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检验科病原体检测技术要点

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CONTENTS

目录

01

03

04

02

检测技术概述

样本采集与处理

分子检测技术

免疫学检测技术

05

质量控制与保证

06

结果解读与报告

01

检测技术概述

病原体分类与检测目标

针对革兰氏阳性菌、阴性菌及厌氧菌等，需通过培养鉴定、药敏试验或分子检测（如PCR）明确菌种及耐药性，重点关注血流感染、呼吸道感染等临床样本。

细菌性病原体检测

包括DNA病毒（如HBV、HSV）和RNA病毒（如HIV、流感病毒），依赖核酸扩增技术（如RT-PCR）、抗原检测或血清学抗体分析，需结合窗口期和病毒载量动态评估。

病毒性病原体检测

针对念珠菌、曲霉菌等真菌采用G试验、GM试验或宏基因组测序；寄生虫（如疟原虫、弓形虫）需镜检、ELISA或分子生物学方法，强调形态学与分子技术的互补性。

真菌及寄生虫检测

灵敏度与特异性平衡

快速检测（如免疫层析法）适用于急诊场景，但可能牺牲准确性；高通量测序虽成本高，却能为疑难病例提供全面病原谱分析，需综合评估医疗资源。

时效性与成本效益

标准化与质量控制

优先选择通过ISO15189认证的检测体系，定期参与室间质评，确保从样本前处理到结果解读的全流程标准化，减少操作误差。

高灵敏度技术（如数字PCR）适用于低载量病原体筛查，而高特异性方法（如测序）用于耐药基因或变异株确认，需根据临床需求权衡假阳/阴性风险。

技术选择基本原则

快速分子检测（如FilmArray）可在2小时内完成多重病原体筛查，但覆盖病原体有限且无法提供耐药信息，需结合传统培养补充。

急诊感染诊断

全基因组测序（WGS）可追溯耐药基因传播链和医院感染源，但对设备、数据分析能力要求高，难以在基层推广。

耐药监测与暴发调查

高灵敏度核酸技术可发现潜伏感染（如HPV），但可能因检出临床意义不明的定植菌导致过度治疗，需严格遵循指南指征。

无症状携带者筛查

应用场景与局限性

02

样本采集与处理

样本类型与采集规范

血液样本采集

采用无菌真空采血管，严格遵循静脉穿刺操作规程，避免溶血和凝血现象，确保样本完整性。采集后需立即轻柔颠倒混匀抗凝剂，防止样本凝固或分层。

呼吸道样本采集

粪便样本处理

使用专用拭子深入鼻咽部旋转停留，确保吸附足够分泌物。采集后需迅速置于病毒保存液中，避免干燥导致病原体失活，同时标注采样部位（如鼻咽/口咽）。

选取含黏液或血丝部分装入无菌容器，量不少于黄豆大小。若检测寄生虫需连续采集，并添加固定液防止病原体降解，避免尿液污染影响检测准确性。

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细菌样本需4℃冷藏运输（如脑膜炎奈瑟菌），病毒样本需-70℃超低温冷冻（如呼吸道合胞病毒），寄生虫样本需常温添加特殊保存液（如甲醛-乙酸乙酯溶液）。

储存与运输条件控制

温度敏感性病原体保存

采用三层包装系统（主容器+吸水材料+硬质外箱），符合UN3373标准。冷链运输需实时监控温度，配备干冰或蓝冰维持恒温，运输记录需包含温度曲线和时效日志。

生物安全运输包装

脑脊液样本需在采集后立即送检（不超过1小时），血培养阳性标本需2小时内转种平板，粪便样本若检测艰难梭菌毒素需-20℃保存并在48小时内完成检测。

时效性控制

前处理标准化流程

核酸提取质控

采用磁珠法或柱提法时需加入内标监控提取效率，CT值偏差需≤2。样本裂解阶段需控制蛋白酶K作用时间和温度（如56℃水浴30分钟），防止DNA/RNA降解。

自动化前处理校准

全自动核酸提取仪需每日运行阴性质控和弱阳性质控，离心机转速需每季度校准，分液系统需定期进行体积验证（误差范围±5%）。

微生物培养前处理

痰样本需进行黏液消化（N-乙酰半胱氨酸处理）和均质化，血培养瓶阳性报警后需革兰染色分级报告，并同步接种血平板、巧克力平板和厌氧平板。

03

分子检测技术

PCR技术原理与应用

采用微滴分割技术实现绝对定量，在低载量样本检测和罕见突变分析中展现卓越灵敏度。

数字PCR创新突破

通过设计多组引物同时扩增多个靶标，显著提高检测通量，适用于呼吸道病原体panel检测。

多重PCR技术优势

结合荧光标记探针，可精确定量病原体核酸载量，广泛应用于病毒载量监测和耐药基因检测。

实时荧光定量PCR应用

通过高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤循环扩增目标DNA片段，实现微量核酸的高效检测。

聚合酶链式反应原理

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Sanger测序金标准

二代测序技术特点

靶向测序panel设计

三代单分子测序优势

采用双脱氧链终止法，准确率高达99.99%，仍是突变确认和临床验证的首选方法。

针对特定病原体基因组设计捕获探针，显著提高测序深度和数据有效性，适用于临床常规检测。

高通量平行测序可同时检测数千个基因，在病原体分型、溯源分析和新发传染病鉴定中发挥关键作用。

超长读长特性可解决复杂重复序列