基于RPA技术裂谷热病毒快速检测方法研究.pdfVIP

临床学54(2012)308–312

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床学jo

用于快速检测裂谷热的重组酶聚合酶扩增检测

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MilenaEuler，YongjieWangb，OliverNentwichc，OlafPiepenburgc，FrankT.Huferta，

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ManfredWeidmann，∗

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大学医学学系，Kreuzbergring57，37075哥廷根德国海洋与食品微生物学，食品科学与技术学院，海洋大

学，，cTwistDx，巴布拉汉园区，巴布拉汉，CB223AT，英国

articleinfo

背景：检测裂谷热（RVFV）的已被证明在现场诊断中具有用途。

文章：收到2212月2011年收到修

订稿85月2012年接受95月2012年

目标：在ESEquant管式扫描仪设备上开发一种等温“重组酶聚合酶扩增（RPA）”检测方法。

研究设计：RPA通过首先开发两步法，然后开发单步逆转录‑RPA协议，以适应RNA扩增。测试了几种逆转录酶，

：RPA重组酶聚合酶扩增裂谷热使用Transcriptor（获得了最佳灵敏度。最终，在RVFV单步逆转录‑RPA中测试了含有重组MuLV的

RT‑RPA颗粒。结果：单步逆转录‑RPA检测的灵敏度为19个分子，通过使用基于RVFVS片段的定量RNA品进

行8次运行的概率分析确定，并检测到20种不同的RVFV毒株。该检测未出现与人类组及典型生物检测

组中几种病原体的交叉反应。其性能几乎与基于甘油缓冲液的Transcriptor检测相当，尽管灵敏度降低了1个数量

级。所单步逆转录‑RPA与便携式荧光读数设备的组合可能是现场或即时检测诊断的有用工具。

©2012ElsevierB.V.。

1.背景（45–55nt）携带一个荧光基团和一个合适的淬灭剂，两者彼此靠

近，均连接在由一个无碱基位点模拟物（四氢呋喃）分隔的胸腺嘧啶碱

裂谷热（RVFV）是一种人畜共患，可引起反刍动物和人基上。这些修饰定位于探针30末端约15个核苷酸的位置。当与目标

类患病。粮食及农业组织（FAO）将其归类为非洲的一种疾分子结合时，无碱基位点被外切酶III识别并切割，促使释放携

病，RVFV的暴发已被证实会带来巨大的经济损失。1,2已有多种用于