玉米大斑病菌几丁质合成酶基因StCHS6：结构剖析与功能探究.docxVIP

玉米大斑病菌几丁质合成酶基因StCHS6：结构剖析与功能探究

一、引言

1.1玉米大斑病及其致病菌概述

玉米大斑病在全球玉米种植区域广泛分布，在我国主要集中于东北、华北春玉米产区以及南方海拔较高、气温较低的山区，在大发生年份，一般减产15%-20%，严重时减产50%以上，甚至绝收。该病害主要为害玉米的叶片、叶鞘和苞叶。发病初期，叶片上出现水渍状青灰色斑点，随后沿叶脉向两端扩展，形成边缘暗褐色、中央淡褐色或青灰色的大斑，后期病斑常纵裂，严重时病斑融合，叶片变黄枯死，潮湿时病斑上有大量灰黑色霉层。

玉米大斑病的致病菌为大斑病凸脐蠕孢（Exserohilumturcicum(Pass.)LeonayetSuggs），属半知菌亚门、丝孢目、凸脐蠕孢属。分生孢子梗从气孔长出，青褐色，单生或2-6根丛生，不分枝，直立或上部有屈膝状弯曲，具有2-6个（多数3-5个）隔膜。分生孢子1至数个顶生，初无色，后变褐绿色，呈纺锤形，直或向一侧弯曲，多数有4-7个隔膜。大斑病凸脐蠕孢有明显的生理分化现象，已知有玉米专化型、高粱专化型、约翰生草专化型、混合专化型等，在中国分布的是1号小种。

1.2真菌细胞壁的组成及功能

真菌细胞壁干重的80%由碳水化合物组成，其主要成分包括几丁质、葡聚糖、甘露聚糖等多糖，另外还含有少量的蛋白质和脂类等。不同的多糖链相互缠绕组成粗壮的链，这些链构成的网络系统嵌入在蛋白质及类脂和一些小分子多糖的基质中，使真菌细胞壁具有良好的机械硬度和强度。在显微镜下可观察到真菌细胞壁有4-8层明显的分层。

真菌细胞壁在真菌的生命活动中发挥着不可或缺的作用，它作为真菌与外界环境的分界面，不仅能够维持细胞的固有形态，还能保护细胞免受外界物理、化学和生物因素的伤害，维持细胞正常代谢、离子交换和渗透压。若细胞壁结构遭到破坏，真菌细胞的完整性和功能将受到严重影响，甚至导致细胞死亡。

1.3真菌中的几丁质合成酶基因家族

几丁质合成酶是催化几丁质合成的关键酶，真菌中的几丁质合成酶由多基因家族编码。根据氨基酸序列的相似性和功能特点，几丁质合成酶基因家族可分为多个类别，不同类别几丁质合成酶在结构和功能上存在差异。比如，不同的几丁质合成酶在催化活性、底物亲和力、表达调控模式以及在真菌不同生长发育阶段和生理过程中的作用都有所不同。在真菌的生长、发育、繁殖以及侵染寄主等过程中，不同类别的几丁质合成酶发挥着各自独特的功能，有的参与菌丝的生长和延伸，有的在孢子形成和萌发过程中起关键作用，还有的与真菌的致病性密切相关。

1.4以几丁质合成酶为靶标的抗真菌药物研究进展

目前，以几丁质合成酶为靶点的抗真菌药物研发取得了一定进展。这类药物主要通过抑制几丁质合成酶的活性，阻碍几丁质的合成，从而破坏真菌细胞壁的结构和功能，达到抑制或杀灭真菌的目的。例如，尼克霉素类药物是一类重要的几丁质合成酶抑制剂，它能够与几丁质合成酶的活性位点结合，竞争性抑制底物的结合，进而抑制几丁质的合成。这类药物在农业和医学领域都展现出了良好的应用前景，在农业上可用于防治多种植物真菌病害，在医学上可用于治疗人类真菌感染性疾病。然而，目前这类药物仍存在一些局限性，如部分药物的抗菌谱较窄、容易产生耐药性等问题，需要进一步深入研究和改进。

1.5本研究的目的与意义

本研究旨在深入探究玉米大斑病菌几丁质合成酶基因StCHS6的结构和功能。通过对该基因的结构分析，能够揭示其分子特征和进化关系；通过功能研究，明确其在病菌生长、发育、致病等过程中的作用机制。这不仅有助于从分子层面深入理解玉米大斑病菌的致病机理，为开发新型、高效、低毒的杀菌剂提供理论依据，也能够为玉米大斑病的绿色防控提供新的策略和靶点，对保障玉米的安全生产具有重要意义。

二、材料与方法

2.1实验材料准备

2.1.1菌株与质粒

本实验所用的玉米大斑病菌菌株为01-23，由河北农业大学真菌毒素与植物分子病理学实验室分离保存。该菌株是玉米大斑病1号小种，在玉米大斑病研究中具有代表性，能够稳定地引发典型的玉米大斑病症状，广泛应用于相关的致病机制和防控研究。

实验中使用的质粒为pCT74，购自Addgene公司。该质粒含有潮霉素抗性基因（hph），可作为筛选标记，用于转化子的筛选。其多克隆位点便于目的基因的插入和表达，在基因工程实验中常被用于构建重组表达载体，为后续的基因功能研究提供了便利条件。

2.1.2培养基

马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基：将200g马铃薯去皮切块，加水煮沸30min后过滤取滤液，加入20g葡萄糖、15-20g琼脂，加水定容至1000mL，121℃高压灭菌20min。PDA培养基营养丰富