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2．细胞因子测定方法与应用

测定方法:

（1）生物学检测法:

又称生物活性检测，是依照细胞因子特定的生物活性而设计的检测法。生物活性检测法又可分为:

细胞增殖法;

靶细胞杀伤法；

细胞因子诱导的产物分析法；

细胞病变抑制法。

(2)免疫学检测法:

细胞因子均为蛋白或多肽,具备较强的抗原性。可运用抗原抗体特异性反映的特征,用免疫学技术定量检测细胞因子。常用的方法包含ＥLＩSＡ、RIA与免疫印迹法。

(3)分子生物学方法:

现在公认的细胞因子的基因均已克隆化,较容易地得到某一细胞因子cDNA探针或依照已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探针。常使用斑点杂交、Nｏrｔheｒnblot、逆转录PCR，细胞或组织原位杂交等。具备灵敏、迅速等优点,甚至从l~10个细胞中就可检出其中的特异mRNA。

临床应用:

细胞因子测定可作为特定疾病诊疗的辅助指标，用来评估机体的免疫状态、判断治疗与预后,用于临床治疗应用时的监测等。

(十六)细胞黏附分子的测定技术

同学们应重点掌握：１.细胞表面黏附分子的测定：2．可溶性黏附因子的测定：3.了解临床应用

白细胞和血管皮细胞、巨噬细胞和上皮细胞等以与血液中均存在细胞粘附分子。

按其结构特点,分有钙离子依赖性家族、整合素家族、免疫球蛋白超家族和选择素家族四大类。

1.细胞表面粘附分子的检测

（１）放射免疫测定法：

通常用抗细胞粘附分子抗体包被载体,加受检样品后，继加相应单克隆抗体和同位素标记的二抗作非竞争性固相放射免疫测定法。

(２）荧光免疫测定法:

用不一样激发波长的荧光素着染色受检细胞，在FACS仪上可同时检测有两种不一样的细胞粘附分子。

（3)酶免疫测定法：

重要为双抗体夹心ELISA,本法应用最广,但仅能检出一群细胞的表面粘附分子数量，而不能反映单个细胞粘附分子数量的变化。

（４）其余方法:

如酶免疫组织化学测定、流式细胞仪分析、时间辨别荧光免疫测定等。

例题：如下哪一个测定方法不属于细胞表面黏附分子的检测方法:

A．酶免疫测定法

B.放射免疫测定法

C.流式细胞仪分析

Ｄ.ＰCR

E．荧光免疫测定法

答案：D

2.可溶性粘附分子的检测:

多采取双抗体夹心ELISA,研究最多的选择素家族和免疫球蛋白超家族。前者有E、Ｌ、Ｐ三型，均可见血液中。对于P、L、E选择素在临床中的应用也需要掌握，哪些疾病出现这三种选择素升高现象。

3．临床应用：

了解。

(十七)免疫球蛋白检测与应用

同学们应重点掌握：1.纯熟掌握免疫球蛋白（Ig）的概述2.掌握Ig测定与临床意义

３．掌握Ｍ蛋白的检测与意义4.掌握冷球蛋白测定

1．免疫球蛋白的概述

（1）免疫球蛋白(Ig）：

是由浆细胞产生，存在于血液和体液(包含组织液和外分泌液)中,也可作为抗原受体体现于B细胞表面。多数Ｉｇ具备抗体活性，可以特异性识别和结合抗原。抗体是机体在抗原刺激下,由浆细胞合成份泌产生的具备与相应抗原发生特异性结合的球蛋白，即具备免疫功效的球蛋白。全部的抗体均是免疫球蛋白,但并非全部免疫球蛋白都是抗体。

（2)化学结构

①Ｉg的基本结构:

Ig分子由4条肽链借链间二硫键连接构成,即2条相同的重链(Ｈ)和２条相同的轻链(L）和几对二硫键连接成一个基本单位，称为单体。IｇG、ＩgＥ、ＩgＤ与多数血清型IｇA皆为单体,分泌型ＩｇＡ为双体,IgＭ为五聚体。免疫球蛋白分子Ｈ链(ＶH和CH)，Ｌ链分(ＶL和CL）。

②功效区：

Ｉｇ分子的H链与L链各区段可经过链二硫键折叠成彼此相同球状结构，担负特定免疫学功效，称为功效区。Ｌ链有两个功效区,称为VL、ＣL。

③Ig的水解片段:

Ig分子可被许多蛋白酶水解,产生不一样的片段。

(3）免疫球蛋白的血清型

①同种型;

类和亚类：

依照Iｇ重链恒定区的结构不一样和抗原特异性的不一样分类。

型和亚型:

依照轻链恒定区肽链抗原特异性的不一样,分两型。

例题：免疫球蛋白的型与亚型分类依据是

A.ＶH抗原性的不一样

Ｂ.CL抗原性的不一样

C.CH抗原性的不一样

D.VＬ抗原性的不一样

Ｅ.CV抗原性的不一样

答案:Ｂ

②同种异型；

③独特型：

抗原决定簇可在异种、同种异体以与自体诱导产生相相应的抗体，称为抗独特型抗体。独特型和抗独特型抗体将整个抗体构成一个网络，称独特型网络。

(4)免疫球蛋白的生物学活性

抗体是具备双功效分子，它既可特异性结合抗原,又可独立诱发或执行一系列生物学效应,由抗体分子不一样部位分别执行。

与抗原结合作用:

具备特异性结合。

补体活化作用:

补体C1ｑ与游离Ｉg分子结合非常薄弱,而与免疫复合物中的IｇG或ＩgＭ（经典途径)或凝聚Ig(代替途径）结合则很强。

例题:可以激活补体代替途径的免疫球蛋白是

A．ＩgG２

B．ＩgM

Ｃ.IgG3

D．凝聚Ig

E.IgG１

答案:D

亲细胞作用：

ＩgG分子能与