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2025/07/22
单克隆抗体制备
汇报人：_1751850234
CONTENTS
目录
01
单克隆抗体概述
02
单克隆抗体的制备方法
03
单克隆抗体的应用
04
单克隆抗体技术的挑战与前景
05
单克隆抗体的商业化与市场
单克隆抗体概述
01
定义与特性
单克隆抗体的定义
抗体单克隆源自单一B细胞克隆，其特性为高度的特异性和统一性。
单克隆抗体的特性
单克隆抗体以其独特的抗原结合点著称，能精准锁定并联结特定的抗原，广泛应用于疾病的检测与治疗。
发展历程
发现与命名
1975年，Kohler与Milstein利用细胞融合技术成功研发出单克隆抗体，从而开启了生物技术的新篇章。
商业化与应用
80年代初，单克隆抗体开始被用于疾病诊断和治疗，如癌症和自身免疫疾病的治疗。
技术进步与创新
基因工程技术的进步推动了单克隆抗体制备技术的优化，从而诞生了更多性能优异、针对性强的抗体。
单克隆抗体的制备方法
02
杂交瘤技术
免疫小鼠制备
选择特定抗原免疫小鼠，使其产生特异性B细胞，为后续杂交瘤细胞的制备提供基础。
脾细胞融合
将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞，这些细胞能产生特异性抗体。
筛选与克隆化
利用HAT培养基挑选杂交瘤细胞，继而对其实施克隆培养，以此保证制备单克隆抗体的同质性。
单克隆抗体的生产
通过选择杂交瘤细胞进行体外或体内腹腔培养，以大批量生产所需单克隆抗体。
人源化技术
嵌合抗体技术
鼠源抗体可变区与人类抗体恒定区相结合的嵌合抗体，能显著降低其免疫原性。
全人源抗体技术
运用转基因小鼠与噬菌体展示技术，可合成纯粹由人类基因编码的抗体。
基因工程方法
抗体基因克隆
采用PCR技术放大抗体基因片段，继后将该片段转入表达载体中，以便进行接下来的表达过程。
细胞转染与筛选
将含有抗体基因的表达载体转染到宿主细胞中，通过筛选得到稳定表达单克隆抗体的细胞系。
表达与纯化
在适宜的培养环境中，促使转染细胞分泌抗体蛋白，随后运用层析技术等手段对蛋白进行纯化，成功获取单克隆抗体。
单细胞克隆技术
嵌合抗体技术
融合抗体通过连接鼠源抗体的可变区与人类抗体的恒定区，降低其免疫原性。
全人源抗体技术
利用转基因小鼠及噬菌体展示技术，可直接制备出全人源抗体，有效减少异源反应的发生。
单克隆抗体的应用
03
临床诊断
发现与初步研究
1975年，Köhler和Milstein通过细胞融合技术成功制备了世界上第一株单克隆抗体。
技术优化与应用拓展
生物技术不断发展，单克隆抗体的生产技术日益完善，其应用范围也从基础的科学研究扩展到了临床治疗领域。
商业化与市场发展
生物医药产业因单克隆抗体药物的商业化进程而迅猛发展，众多单抗药物已崛起为治疗癌症及自身免疫病的首选治疗手段。
治疗应用
单克隆抗体的定义
单克隆抗体源自单个B细胞克隆的生成，具备极高的特异性和一致性。
单克隆抗体的特性
单克隆抗体凭借其独特的抗原结合点，能够精确锁定并连接特定的抗原，在疾病诊断与治疗领域发挥关键作用。
研究工具
抗体基因克隆
利用PCR技术对抗体基因片段进行扩增，继后将该片段转入表达载体，以便进行后续的基因表达。
细胞转染与筛选
将含有抗体基因的表达载体转染到宿主细胞中，通过筛选获得稳定表达单克隆抗体的细胞株。
表达与纯化
在理想培养条件下，促使转染细胞生产抗体蛋白，随后采用层析等手段对其进行纯化，最终获得高纯度的单克隆抗体。
单克隆抗体技术的挑战与前景
04
技术挑战
01
嵌合抗体技术
通过结合鼠源抗体的可变区与人源抗体的恒定区，嵌合抗体降低了免疫原性。
02
全人源抗体技术
利用转基因小鼠与噬菌体展示技术，可直接生产全人源抗体，有效减少免疫反应的潜在风险。
发展趋势
01
免疫小鼠
选择特定抗原免疫小鼠，使其产生特异性B细胞，为后续杂交瘤细胞的制备提供基础。
02
融合细胞
融合免疫小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞，生成杂交瘤细胞，此类细胞具有产生特定抗体的能力。
03
筛选杂交瘤细胞
采用HAT培养基进行筛选，挑选出能分泌特定抗体的杂交瘤细胞，同时去除未发生融合或呈现非特异性反应的细胞。
04
克隆化培养
将筛选出的杂交瘤细胞进行克隆化培养，确保每个克隆产生的抗体具有相同的特异性。
未来应用展望
初代单克隆抗体技术
1975年，Köhler与Milstein共同创建了杂交瘤技术，为单克隆抗体的研究打下了坚实的基础。
基因工程单克隆抗体
随着基因工程技术的进步，研究人员运用DNA重组技术成功生产出单克隆抗体。
全人源单克隆抗体
为减少免疫原性，研究人员开发了全人源单克隆抗体，如阿达木单抗。
单克隆抗体的商业化与市场
05
生产流程
嵌合抗体技术
将鼠抗体的可变区与人抗体的恒定区相结合，形成嵌合抗体，以此降低免疫原性，增强其在临床上的应用效果。
全人源抗
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